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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wolfebst(金币+5, EPI+1): 鼓励 2011-07-06 08:49:14

我认为你还是别把原来的启动子弄出来，就用载体上的启动子，原因有2：
1、载体上的启动子是适合载体表达所用的，一般是诱导表达，表达可以控制，但是原启动子已经离开了原基因组，没有表达原件，也不知道是组成型还是诱导型的，表达控制条件不可知，可能对实验造成影响。
2、将原启动子弄出来之后可能会产生什么空间构象的影响，不利于表达。
3、原启动子存在时，如果使用载体上的启动子，增加的序列中可能会有ATG，那么转录出来的多肽会比预想中加长。

我觉得还是提取cDNA做RT-PCR好一点，因为真核生物和大肠杆菌的RNA剪辑可能不同，所以表达出来的蛋白质可能会移码，比预想的多几个氨基酸残基，可能不是你想要的蛋白质。