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jinglh8288

木虫 (正式写手)

[求助] HPLC梯度洗脱,总出现很强的一个峰怎么回事?

实验室新买了一台快速色谱,用的是2.1*50的XDB-C18的色谱柱,0.25mL/min的流速,自动进样器进样,乙腈水为流动相,梯度条件是50%B运行4min,线性梯度,10min时乙腈增加到100%,并维持10min,结果不论是运行样品还是只走流动相,还是进甲醇,在大概14min都会出现一个很强的峰,而且基线漂移,同时监测压力可以看到在大约13min到14min之间压力会从大约135bar降到90bar左右,随后采集的信号和压力基本都为直线……请问这到底是怎么回事呢?进样前,色谱柱已经充分平衡好了!很急,谢谢大家的帮助!
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一分耕耘,一分收获。
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yukepotato

金虫 (正式写手)

美猴王

1、麻烦楼主上下图看看,不知道是怎么个情况。也许是正常的梯度波动,也可能就是出现的问题!
2、应该不会是水方面的原因吧。流动相所用的谁应该都是纯水!
永远不要带着问题去找你的上司!
12楼2011-07-05 21:21:58
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yukepotato

金虫 (正式写手)

美猴王

引用回帖:
Originally posted by jinglh8288 at 2011-07-06 08:33:36:
如何贴图啊,不知道……最近两天不能上传附件啊!
水是娃哈哈纯净水,应该没问题吧,而且0.2um滤膜过滤!
100%乙腈冲洗色谱柱50分钟都不见压力和和信号有波动,应该不是柱子污染吧?
难道是像上面的虫友所说 ...

那很可能你的水就有问题啊!
最好是能上个图!
永远不要带着问题去找你的上司!
22楼2011-07-06 18:07:45
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yukepotato

金虫 (正式写手)

美猴王

我看了下你的图和描述。那压力变化和基线波动都是正常的,因为你是梯度不是走的等度。
此外在14min的峰很可能是系统或是流动相引起的,你可以逐一排除!
等待楼主的反馈!

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永远不要带着问题去找你的上司!
31楼2011-07-07 18:50:47
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yukepotato

金虫 (正式写手)

美猴王

引用回帖:
Originally posted by jinglh8288 at 2011-07-08 08:19:57:
请问如何排查呢?我走了空针和甲醇结果和走样品一样……另外昨天又连接了两通,走了相同的方法,结果仍然有波动,只不过不像接柱子时那样是很大的峰,这说明什么呢?谢谢!

有没有换换流动相试试啊?
永远不要带着问题去找你的上司!
33楼2011-07-08 11:49:19
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