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lixuepu

金虫 (正式写手)

[求助] 量子点与抗体的偶联

最近在做一个量子点与羊抗猪的IgG的偶联，也就是我的二抗，分子量大概150KD，我加的NHS和EDC的比例一般是1.2：1，量子点是巯基丙酸修饰的，量子点和EDC比例大概1：1000，一般先加EDC,NHS活化量子点半小时，再加1.2倍的IgG但是每次练完之后连上蛋白的量子点很少，用100KD的超滤管超滤后量子点位置几乎都没有荧光了，做了几次后面的免疫，效果都很差，比如EDC和NHS，我也换了其他的比例，但是效果都很差，我之前用BSA做完之后，做电泳效果还好…… 但是这个IgG总是连不上，跪求高人指导啊………………
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奋斗就有希望。
1楼 2011-07-03 16:12:07
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zkwysw

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

lixuepu(金币+4): 2011-08-30 10:36:15
将2nmol 量子点加入50 uL 浓度为50 mM的EDC水溶液,
加入适量的抗体分子 (通常与量子点的数量比为5:1至10:1)
室温下温和振荡2小时,结束反应.
纯化
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14楼2011-08-12 11:07:34
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lixuepu

金虫 (正式写手)
顶一下啊，别沉了…… 希望大家指导下
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奋斗就有希望。
2楼2011-07-03 18:32:24
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qinyubinglan

铁虫 (正式写手)

将军

【答案】应助回帖

lixuepu(金币+4): 谢谢额 2011-07-04 08:19:05
引用回帖:
Originally posted by lixuepu at 2011-07-03 16:12:07:
最近在做一个量子点与羊抗猪的IgG的偶联，也就是我的二抗，分子量大概150KD，我加的NHS和EDC的比例一般是1.2：1，量子点是巯基丙酸修饰的，量子点和EDC比例大概1：1000，一般先加EDC,NHS活化量子点半小时，再加1. ...

量子点与抗体连接，单独的EDC就可以，反应的PH值应该在酸性的条件下，一般在水中就可以，具体做法是先用EDC（不要加太多，这个很重要，要不量子点会沉淀，一般是量子点摩尔浓度的100倍就很好），活化羧基的QD，然后加入抗体。在反应几个小时，在摇床上效果更好。祝你成功。
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3楼2011-07-03 20:26:06
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ruoruo051987

禁虫 (职业作家)
lixuepu(金币+3): 谢谢额 2011-07-04 08:19:19
本帖内容被屏蔽
4楼2011-07-03 21:05:30
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