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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请教个毕赤酵母表达的问题
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diana0423

金虫 (小有名气)

[求助] 请教个毕赤酵母表达的问题

前段时间看了篇福建师范大学的硕士论文，那位作者用pPIC9K表达了一个木霉的内切葡聚糖酶。她是用Bgl线性化载体转化的。PCR验证得到阳性克隆后，她在论文里提到可以用YPD培养基发酵阳性克隆48小时，然后取上清测定内切葡聚糖酶的酶活力，来判断目的蛋白是否表达。这个地方让我很困惑。醇氧化酶的调控不是受到葡萄糖的抑制吗，为什么她可以用YPD培养基发酵得到内切葡聚糖酶，希望能有朋友为我解惑。
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1楼 2011-07-02 00:50:11
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diana0423

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zheng20089829 at 2011-07-02 19:56:25:
这个质粒好像是甲醇诱导型的表达吧，质粒包含了AOX启动子，添加甲醇诱导外援基因的表达

这个我知道，所以我很纳闷为什么他用YPD也能诱导表达。
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3楼2011-07-03 00:01:28
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zheng20089829

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

diana0423(金币+2): 谢谢回复 2011-07-03 00:01:51
这个质粒好像是甲醇诱导型的表达吧，质粒包含了AOX启动子，添加甲醇诱导外援基因的表达
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2楼2011-07-02 19:56:25
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zheng20089829

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by diana0423 at 2011-07-03 00:01:28:
这个我知道，所以我很纳闷为什么他用YPD也能诱导表达。

这个是有点奇怪，联系作者。。。
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4楼2011-07-03 10:43:23
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biopanda

铜虫 (小有名气)
可能只是产酶量得问题。用YPD也能产酶，但是产酶量小，前提应该也要甲醇诱导吧。
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仕不可不弘毅，任重而道远。
5楼2011-07-03 19:59:16
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