应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 微生物降解纤维素的纤维素酶活如何测？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
11/1返回列表
查看: 4645  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yhjcwangyw

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
uulove37(金币+5): 2011-06-30 20:39:06
wolfebst(金币+5, EPI+1): 鼓励 2011-06-30 22:00:53
我当时的测定方法
主要试剂配制方法
1．硝基水杨酸（DNS）试剂[91]: 称取酒石酸钾钠91g，溶于500ml蒸馏水中，加热至50℃溶解，再依次加入3，5-二硝基水杨酸(DNS)3.5g，NaOH20g，苯酚2.5g，无水亚硫酸钠2.5g，搅拌至完全溶解。冷却后用蒸馏水定容至1000ml，储于棕色瓶中4℃保存，放置1周左右后使用，使用前过滤。
2．1mg/lml标准葡萄糖溶液：精确称取105℃烘至恒重的无水葡萄糖(分析纯)1.000g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml容量瓶中备用。
3．1%CMC底物溶液：1克CMC加热溶化于100m1pH值4.8，0.lmol/L的柠檬酸一檬酸钠缓冲液中。
4．pH值4.8，0.lmol/L的柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液:
0.lmol/L柠檬酸：含柠檬酸•H2O21.01g/L。
0.lmol/L的柠檬酸三钠：含柠檬酸三钠•2H2O 29.4g/L。
0.lmol/L的柠檬酸40ml与0.lmol/L的柠檬酸三钠60.6ml混合即可。
5. KH2PO4-Na2HPO缓冲液（pH7.0）
取 4.539 克 KH2PO4 和 11.939 克 Na2HPO4•12H2O，溶解于蒸馏水中，定容至1000mL，用 0.5mol/L KH2PO4 或 0.5mol/L Na2HPO4 调至 pH7.0。

3，5-二硝基水杨酸（DNS）法测定还原糖
测定原理
纤维素经纤维素酶水解后生成还原糖，还原糖能将3，5—二硝基水杨酸（DNS）中硝基还原成氨基，溶液变为橙色的氨基化合物（:3—氨基—5—二硝基水杨酸)，在一定的还原糖浓度范围内，橙色的深度与还原糖的浓度成正比，从而可推算出溶液中还原糖的含量。
葡萄糖标准曲线绘制
取七只25ml的比色管，分别编号，然后按下表加入试剂后，540nm测定吸光值，绘制葡萄糖标准曲线。
       葡萄糖标准曲线绘制
Table2-3 Glucose standard curve drawing
项目    管号        0        1        2        3        4        5        6
葡萄糖标样（ml）        0        1.5        2        2.5        3        3.25        3.5
含糖总量（mg）        0        1.5        2        2.5        3        3.25        3.5
DNS（ml）        3        3        3        3        3        3        3
加水至10ml刻度线
沸水煮沸10min，使其充分反应后，流水快速冷却
定容        25        25        25        25        25        25        25
纤维素酶酶活测定
1 滤纸酶活测定
以滤纸为底物，在一定反应条件(pH4.8，50℃，恒温lh)下，以水解反应中lml纤维素酶液lmin催化纤维素生成lµg葡萄糖为1个滤纸酶活单位，以U表示，该酶活力代表了纤维素酶的三种酶组分协同作用后的总酶活。测定方法为：取1ml适当稀释的酶液，加入pH值为4.8，0.lmol/L的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液2ml，再加入50土0.5mg滤纸(1cmx6cm)一条，于50℃保温酶解反应1小时 (先预热5分钟)，然后加入DNS显色液3ml，放入已沸腾的水中沸水浴10min，流水冷却后在540nm下测吸光度。同时用100℃煮沸10min后失活的酶液作为空白对照。根据吸光度从葡萄糖标准曲线中查出相应的葡萄糖含量，根据生成的葡萄糖克数计算出酶活值。滤纸酶活按下面公式计算:：X=(WxNxMx1000)/T
X：滤纸酶酶活力，单位U/ml；W：从葡萄糖标准曲线中查得的葡萄糖的浓度(mg/ml)。
M：反应后样品总体积(ml)；N：酶液稀释倍数；T:反应时间(min)。
2 CMC酶活测定
以1%CMC溶液为底物，在一定反应条件(pH4.8，50℃，恒温30min)下，以水解反应中，lml纤素酶液lmin催化纤维素生成lµg葡萄糖为1个CMC酶活单位，以U表示。该酶活代表了纤维素酶内切葡聚糖酶活力。测定方法为：取1ml适当稀释的酶液，加入1%CMC底物溶液2ml，50℃保温酶解反应30min(先预热5分钟然)后加入DNS显色液3ml，放入已沸腾的水中沸水浴10min，流水冷却后在540nm下测吸光度。同时用100℃煮沸10min后失活的酶作为空白对照。根据吸光度从葡萄糖标曲线中查出相应的葡萄糖含量，根据生成的葡萄糖克数计算出CMC酶活值。
赞一下(10人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

siwonyy
分享信息，提高自己
2楼2011-06-30 09:39:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~

科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
相关版块跳转 我要订阅楼主 uulove37 的主题更新
11/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 12:04 by 王保杰33
[考研] 材料277求调剂 +7 min3 2026-03-24 7/350 2026-03-28 11:39 by xuxiang
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +7 hanamiko 2026-03-27 7/350 2026-03-28 09:56 by 李上岸0921
[考研] 328求调剂 +7 嗯滴的基本都 2026-03-27 7/350 2026-03-28 04:19 by fmesaito
[考研] 求调剂 +8 张zz111 2026-03-27 9/450 2026-03-28 03:41 by fmesaito
[考研] 287求调剂 +10 land xuxu 2026-03-26 10/500 2026-03-27 15:33 by 帕尔马拉特
[论文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 Russ_ss 2026-03-25 5/250 2026-03-27 10:49 by 陆小果画大饼
[考研] 324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-26 10/500 2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 284求调剂 +11 junqihahaha 2026-03-26 12/600 2026-03-27 04:37 by wxiongid
[考研] 329求调剂 +5 1() 2026-03-22 5/250 2026-03-26 20:40 by fmesaito
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料，材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 281求调剂 +3 亚克西good 2026-03-26 5/250 2026-03-26 19:48 by 不吃魚的貓
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +17 RichLi_ 2026-03-25 17/850 2026-03-26 19:44 by plmuchong
[考研] 340求调剂 +3 Amber00 2026-03-26 3/150 2026-03-26 18:57 by 不吃魚的貓
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 332求调剂 +6 032500 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:45 by 418490947
[考研] 300分，材料，求调剂，英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭