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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有用过pPICZB质粒的虫友吗？
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worm2010

金虫 (小有名气)

[交流] 有用过pPICZB质粒的虫友吗？

正打算最近要转化毕赤酵母，用pPICZB质粒转化。看了毕赤表达手册但是有些问题没搞明白，请各位虫友赐教！

1 转化毕赤（例如GS115），pPICZB是包内表达型的质粒，请问选取表达试剂盒里的对照时应该选哪种质粒进行转化？

2 转化后表型的筛选目的我不是很清楚，为何要筛选表型呢？

3甲醇利用正表型和慢表型哪个用来表达比较好？
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1楼 2011-06-27 13:22:19
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zheng20089829

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
GS115是甲醇利用快速型，KM71H是慢速型，一般要发酵前者用的比较多。每种蛋白也不一样，楼主用胞内的话纯化起来不太方便，可以用Za系列的试试，可以的话会方便很多，如果有糖基化可以用去糖基化酶处理下，不影响活性问题也不大
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8楼2011-06-29 21:54:58
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biopanda

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
做毕赤酵母很少用胞内表达吧，楼主为什么选择这个？
甲醇利用快慢型实验室中影响不大。
筛选转化子的目的是防止假阳性，以及筛选高拷贝转化子
ABC的差别是酶切位点不同，根据实验需要选取（不能与目的基因含有德尔酶切位点相同），别的没差别。
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3楼2011-06-28 13:06:19
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worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by biopanda at 2011-06-28 13:06:19:
做毕赤酵母很少用胞内表达吧，楼主为什么选择这个？
甲醇利用快慢型实验室中影响不大。
筛选转化子的目的是防止假阳性，以及筛选高拷贝转化子
ABC的差别是酶切位点不同，根据实验需要选取（不能与目的基因含有 ...

我选这个胞内表达是为了防止目的蛋白被糖基化。重组的目的基因是来自于细菌的
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4楼2011-06-28 19:51:16
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worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by biopanda at 2011-06-28 13:06:19:
做毕赤酵母很少用胞内表达吧，楼主为什么选择这个？
甲醇利用快慢型实验室中影响不大。
筛选转化子的目的是防止假阳性，以及筛选高拷贝转化子
ABC的差别是酶切位点不同，根据实验需要选取（不能与目的基因含有 ...

我想问，筛选表型的目的，而不是筛选转化子的目的。
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5楼2011-06-28 19:52:49
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