应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆基因连接到载体上测序发现有一个点突变怎么办？
171/2返回列表12下一页
查看: 5871  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

wendaojue

铜虫 (著名写手)

[求助] 克隆基因连接到载体上测序发现有一个点突变怎么办？

克隆基因连接到载体上测序发现有一个点突变怎么办？
做了好几个连接，都连上了，但是测序发现有一个点突变，用什么方法能去除呢？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

空谷幽风

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-17 21:34:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): good 2011-06-18 10:04:25
重新克隆吧~
或者用点突变试剂盒，不过这个太贵。
建议你克隆基因的时候选用高保真的酶，这样突变概率比较小。也不会比普通酶贵很多。
如果克隆的顺利的话 ，应该很块的，实在是不想重新克隆，那做点突变也很耗时间，耗钱。也可以用突变PCR，然后拼接。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-17 21:51:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zougx810

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励新虫交流 2011-06-18 10:04:45
一、选择高保真的酶做PCR扩增
二、多选择几个单克隆去测序
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-17 21:53:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

dhd997(EPI+1): 2011-06-18 09:26:11
wendaojue(金币+2): 谢谢！ 2011-06-22 16:39:43
1:首先看楼主是做什么用了，做什么用很关键的，你如果想表达蛋白，那么重新克隆吧。。。如果是做敲除，构建重组载体，那大可不必。

2：其实见第一条，已经说了，目的不同，操作不同，思路也不同；

3：祝好运！
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-06-17 21:59:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-06-17 21:59:40:
1:首先看楼主是做什么用了，做什么用很关键的，你如果想表达蛋白，那么重新克隆吧。。。如果是做敲除，构建重组载体，那大可不必。

2：其实见第一条，已经说了，目的不同，操作不同，思路也不同；

3：祝好运！

我觉得他是做表达，不是敲除重组，要不然不会这纠结。

表达或者是重组都需要重做的。重组敲除未必，看样子不像做敲除啊

我现在做的和你有点相似，就是把载体上的基因连带启动子一起重组到基因组上。

祝实验成功！
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-17 23:23:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
引用回帖:
Originally posted by gwbk at 2011-06-17 23:23:38:
我觉得他是做表达，不是敲除重组，要不然不会这纠结。

表达或者是重组都需要重做的。重组敲除未必，看样子不像做敲除啊

我现在做的和你有点相似，就是把载体上的基因连带启动子一起重组到基因组上。

...

我？我现在不做这个，我现在做的很多。。。。那个东西我原来做过而已。。。呵呵！
赞一下 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-06-18 10:26:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

听雪看山

木虫 (职业作家)

西游家族之T所长

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

从新克隆吧！
我构建的一个载体，都从新做过好几次了
赞一下 回复此楼
开花可要欣赏，然后就去远行；唯有不等花开，才能记得花红。
7楼2011-06-18 15:23:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
赞一下
8楼2011-06-18 16:48:59
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

啮风

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎应助 2011-06-19 12:19:49
克隆出现点突变很正常的啊，如果是做表达，只要你翻译的蛋白序列正确就OK了，毕竟很多氨基酸有多个密码子，核苷酸序列又不一定要100%相同。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-06-18 23:57:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 好方法。不过overlaping PCR不容易上手。 2011-06-22 16:30:17
做了几次构建，都有相同的突变
那大概就是模板突变了
很简单的处理方法，分两段PCR，用引物修正突变位置，最后overlap在一起。
直接把质粒P下来的点突变方法也OK，不需要买试剂盒，多看看相关文献和经验就行
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-06-21 11:46:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wendaojue 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +6 瞬息宇宙 2026-09-01 12/600 2026-09-02 16:56 by tjutjulee
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭