应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR 扩全长
51/1返回列表
查看: 2754  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lidongqiao

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR 扩全长

各位高手，我现在在扩基因全长，扩了3个月了，一点结果也没有。具体情况是跑电泳结果是点样孔处有亮带，其他什么都没有，开始我认为是不是当时提的RNA不纯，里面还有蛋白质或DNA，所以又重新提了一次，结果还是这个样子。
序列1的5端到3端sense primer:ATGGAGGTACAGAGAGTTCAAG
            5端到3端antisense primer:TCACTGTGGAAGCTTGTTTAAC
序列2的5端到3端sense primer:ATGGTTCAAGCAGAAATGGT
             5端到3端antisense primer:TTACACGGTTAAGTTCCTGGT
退火温度从65到53都试过了，也还是不行：也用过touchdown好多次，还是不行，怎么解决呢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2011-06-15 16:38:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lidongqiao at 2011-06-15 19:07:14:
谢谢，我扩的全长是1000多bp，第一对引物，软件上给的上游的退火温度是52.9，下游是55度，送到生工去合成后，反馈回来写的第一对引物上游是58.21度，下游是56.35，第二对引物，软件上给的上游的退火温度是54.5 ...

你这个引物用60度一点问题都没有，从oligo看62度左右
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

lidongqiao
6楼2011-06-15 21:10:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

love_st

金虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1): 鼓励应助 2011-06-15 19:33:00
帮你看了下第一对的上下游引物，下游引物二聚体稍微有点大，引物之间的二聚体也稍微有点，不过应该影响不大的，你应该再提供下其它的信息
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-15 16:50:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励应助 2011-06-15 19:33:06
才提几次RNA  提了十次再来说技术问题。 实验就是熟能生巧。  我认为你的问题是RNA的纯度。以及后续反转cDNA的问题。和引物关系不大
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-15 17:42:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidongqiao

铜虫 (小有名气)
★ ★
silicare(金币+2): 鼓励交流 2011-07-07 17:28:58
引用回帖:
Originally posted by love_st at 2011-06-15 16:50:35:
帮你看了下第一对的上下游引物，下游引物二聚体稍微有点大，引物之间的二聚体也稍微有点，不过应该影响不大的，你应该再提供下其它的信息

谢谢，我扩的全长是1000多bp，第一对引物，软件上给的上游的退火温度是52.9，下游是55度，送到生工去合成后，反馈回来写的第一对引物上游是58.21度，下游是56.35，第二对引物，软件上给的上游的退火温度是54.5，下游是53.7度，送到生工去合成后，反馈回来写的第一对引物上游是54.4度，下游是56.06，你看按哪个说的好些？是软件上的还是合成后订单上给的呀
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-15 19:07:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 11:51 by l0VvVHGBGRLv
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:18 by l0VvVHGBGRLv
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:07 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-30 10:33 by winsaint
[基金申请] 面上意见出来了 +9 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 17/850 2026-08-30 10:28 by 孤独的英雄6
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 07:05 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 06:22 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 06:00 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 05:40 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:45 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +5 德尚中行 2026-08-27 6/300 2026-08-29 18:10 by manplx
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭