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五木凋零

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于蛋白质粘稠的问题

我用硫铵沉淀得到的蛋白质样品,粘稠,且有点像果冻一样,根本没有办法做后续试验,求高人帮助
样品里面的蛋白含量并不高
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

微生物在培养过程中产生多糖是很正常的,就像黄单胞菌一样,培养基里没有加多糖,但发酵出来却能用乙醇提取得到很多多糖,所以也不知道你的这个菌是不是在发酵过程中产生了多糖了。

糖蛋白是在蛋白质的氨基酸残基上连接糖分子,可以连接一个也可以连接多个,糖链可以只有一个也可以有多个连接成链条,至于你的这个蛋白质会不会形成和形成怎样的糖链就难说了,可以查一下已经发表的文章,参考一下。但是我觉得,如果只有一个蛋白质形成糖链为糖蛋白,也不可能引起那么高的粘度,因为一个蛋白质的表达量一般不会超过1%的总蛋白,除非是人为改造过的菌造成某个蛋白质表达量超高,要么就是很多蛋白质都形成糖蛋白,但更有可能的是有多糖,因为多糖的链可以是很长的。

过层析柱不一定意味着样品被稀释,过镍柱会稀释,但你的蛋白质从你的表述上来看应该是野生蛋白质,不能过镍柱。过分子筛是绝对会被稀释的,过疏水层析和离子交换说不定还能浓缩,因为我试过把300毫升酶液上到20毫升柱床体积的离子交换层析柱中,洗脱后有酶活力的收集管合并之后只有50毫升。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-06-17 01:07:25
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-06-13 17:43:44
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五木凋零

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 五木凋零 at 2011-06-13 16:17:34:
我用硫铵沉淀得到的蛋白质样品,粘稠,且有点像果冻一样,根本没有办法做后续试验,求高人帮助
样品里面的蛋白含量并不高

不是那个问题,就是酶蛋白本身的问题的。之前的方法没有解决这个问题
3楼2011-06-14 12:02:07
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五木凋零

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-06-13 17:43:44:
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3204408

跟这个一样?

之前的方法不管用
4楼2011-06-14 12:02:50
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