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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE浓缩胶不能压成一条线，速度特别的慢，要2个小时
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gandanly

金虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE浓缩胶不能压成一条线，速度特别的慢，要2个小时

前一段时间跑胶还是正常的，我用的是大板跑胶，恒流40ma，以前我都是3.5小时全部结束的。但是，目前的问题是loading buffer在SDS-PAGE浓缩胶不能压成一条线，感觉是散开的，成一片了，Maker在浓缩胶的时候就可以看出来是分开的，很多条细小的带，同时在浓缩胶的时候速度特别的慢，要2个小时多（以前也就半小时），最近我配了电泳缓冲液，Tris-Glycine-SDS, 调到pH 8.3了（用NaOH或HCl调的）。我测了没有问题，别人配了浓缩胶30.8，他说也没有问题的。电泳进入到分离胶之后过一段时间loading buffer就又成为一条线，最后目标蛋白也能做出来，但是没有以前好。但是电泳比以前多了2-3小时。请教哪位高手给我点拨一下。我用的是Bio-rad的电泳系统，比较老了，但是前一个月做的还不错的，现在就悲催了啊！
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coz i love you!
1楼 2011-06-08 06:37:42
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

gandanly(金币+1): 我用的试剂是按照以前的方法配的，新配了Running buffer和浓缩胶30.8。应该没有问题啊！ 2011-06-08 22:52:33
我认为问题出在你试验所用的试剂，你现在所用的试剂跟前段时间所用的试剂是同一个吗？还是用完了某种试剂，又换了或配了新的试剂？另外，你的存储液放置是不是太久了？
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转向地质微生物学
2楼2011-06-08 08:04:16
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gandanly

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gandanly at 2011-06-08 06:37:42:
前一段时间跑胶还是正常的，我用的是大板跑胶，恒流40ma，以前我都是3.5小时全部结束的。但是，目前的问题是loading buffer在SDS-PAGE浓缩胶不能压成一条线，感觉是散开的，成一片了，Maker在浓缩胶的时候就可以看 ...

我用的试剂都是新配的，想咨询一下，是浓缩胶本身的问题么？
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coz i love you!
3楼2011-06-08 22:51:04
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btx362237729

金虫 (正式写手)
我跑10%的分离胶 5%浓缩胶。。。浓缩胶要2小时多。。分离胶也要2小时  条带都很正常
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人生最黑暗的时光终于过去了
4楼2011-07-24 21:24:25
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许许小静

新虫 (初入文坛)
请问你用的大板  是什么规格的？20cm×20cm的吗？
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5楼2013-06-20 10:20:41
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rv1nm2y

银虫 (小有名气)
我感觉应该是浓缩胶的问题，我们前几天做了一个，也是没有办法成一条直线下来，但是之前这个浓缩胶就可以，应该是放置时间过长。LZ的胶如果是新配的话，应该也会有点问题吧，不过这个好像没有什么大碍，到了分离胶的地方又会成一条直线了（我做的就是这样ORZ，~虽然不知道为什么，不过我电流加大了）跑出来的效果虽然也能看，但还是搬不上台面啊~~~
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黑白VS兔子
6楼2013-06-23 19:27:18
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黑白VS兔子

木虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by rv1nm2y at 2013-06-23 19:27:18
我感觉应该是浓缩胶的问题，我们前几天做了一个，也是没有办法成一条直线下来，但是之前这个浓缩胶就可以，应该是放置时间过长。LZ的胶如果是新配的话，应该也会有点问题吧，不过这个好像没有什么大碍，到了分离胶的 ...

您好，我也遇到了这样的情况 浓缩胶不能压成线  分离胶倒是压成一条线了，不知道怎么回事，请问您现在解决那个问题了么？是怎么回事？谢谢！
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7楼2013-12-20 19:22:03
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renyuan521

新虫 (初入文坛)
请问解决了么
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8楼2021-08-18 15:20:24
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