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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

[求助] 采用巢式PCR扩增

最近一直用巢式PCR扩增目的片段,P了好久就不出来,想听听各位虫虫的建议
外侧引物的TM值分别为63.3、67.1
内侧引物的TM值分别为51.2、53.0(不算酶切位点的TM值)
                     71.2、72.2(包括酶切位点的TM值)
用什么条件P会好些?
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ljx2ljx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by deblway at 2011-05-30 11:07:48
具体条件我想应该需要做梯度才能确定呢。。以前我也碰到过类似问题,我的解决办法是外侧引物首先用较低的温度去P,不去管它的非特异性有多强,只要控制循环数过少的引入PCR过程中带来的突变即可。。。然后利用外侧P ...

您好,我做巢式PCR做了一周多了,用特异性引物和此模板可以扩增出来,第一轮一直没有东西,第二轮也没有东西。退火温度和模板梯度都做了,但是还是不行。可能原因有哪些呢?
4楼2013-05-16 22:10:50
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