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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR无任何条带，完全是空白胶
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武荷花S

新虫 (小有名气)

[求助] PCR无任何条带，完全是空白胶

我最近做PCR时，模板是基因组，电泳图除了Marker外，其他的一丁点条带都没有，完全是空白胶。我把所有体系全换新的，仍然没有，现在怀疑是引物问题，想验证下引物。打算用高浓度的琼脂胶（3%）来跑胶，能验证吗？





[ Last edited by 武荷花S on 2011-5-29 at 22:25 ]
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1楼 2011-05-29 22:07:08
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武荷花S

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by andy99990000 at 2011-05-30 00:23:51:
楼主的图里有阴性对照吗？如果已包括的话，可以排除PCR体系污染的可能，那么很明显你的PCR没有正常工作，可能的原因很多，以个人经验，楼主可以尝试以下几个检测方法：

1. 用实验室一定工作的引物扩增你的DNA, ...

谢谢你的建议。图中没有阴性对照。我又用该模板，用其他引物进行扩增，其中此时用的引物以前都能P出来条带，所有的东西我全换成新的，PCR程序设置也没有问题，模板重新跑胶，还是可以的，可还是这种现象，这到底什么问题，实验又找不到原因了？
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7楼2011-05-30 20:10:40
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cellline

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼主给的信息太少，不知你的模板是什么，我首先想到的是你的PCR模板质量如何？引物是参照什么去合成的还是借用别人的，
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2楼2011-05-29 23:19:18
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andy99990000

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): 很好 2011-05-30 08:28:39
武荷花S(金币+3): 2011-05-30 20:04:08
楼主的图里有阴性对照吗？如果已包括的话，可以排除PCR体系污染的可能，那么很明显你的PCR没有正常工作，可能的原因很多，以个人经验，楼主可以尝试以下几个检测方法：

1. 用实验室一定工作的引物扩增你的DNA,这样能够看出除你的引物以外其他试剂是否工作正常。
2. 确定是引物的问题后还有2种可能：
（1）你的PCR条件不适。按你的图来看，完全没工作，可以试试降低退火温度，做touchdown，或者增加Mg离子浓度及循环次数等。
（2）如果以上全试过还是不工作，那么很大程度上就是你的引物设计或者合成的问题了。解决方法就是重新设计或者合成，呵呵，废话了。

个人经验，希望有所帮助~~
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3楼2011-05-30 00:23:51
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eydalhm

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): 鼓励交流 2011-05-30 08:28:57
我认为可能原因有：1.PCR引物问题，那就要换引物·~这个我还没碰见过。
                  2.PCR所用模板DNA浓度低了或者扩增效率不够，这种情况下，你适量增加几个（3-5）循环可能就有条带了·~有时候扩增效率低的话就会这样·~
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飞跃寄托梦想
4楼2011-05-30 01:42:39
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