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ahdongn木虫 (小有名气)
使者
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[求助]
PCR问题求助，感谢大家
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大家好！我现在PCR，做人血的基因组，预试验结果挺好的，现在正式实验了，反而不好了，有一个现象就是空白对照（未加模板）出现目的条带，是不是考虑污染了？昨天买了有滤蕊的枪头，重全成的引物，在试剂公司买的TE溶的引物，买的去离子水，空白对照还是有条带，不知道什么原因？是污染还是引物特异性不好！ 上游 5’-ataatgtaagctcatccacc-3’ 下游 5’-gagattgcatttctgtcagt-3’ 这是我的引物序列，目的条带是350BP,空白出现的也是差不多。谢谢大家 |
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yabxxh
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dhd997(金币+5): good 2011-05-30 12:59:11
dhd997(金币+5): good 2011-05-30 12:59:11
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引物特异性我刚blast了一下，如果你只是350的片段的话，在人基因组里面是特异的，因此建议排除引物特异性的问题。 东西全换掉是必需的，这里不但包括试剂，还包括你的枪头和PCR管，因为我知道有些人插枪头是不带手套的。 因为你P的是人的基因组DNA，所以你自己身上的东西也极有可能成为模板，带上口罩，手套，再做一遍，不行就拿别人的一套东西做个对照。 还有一种可能，是你加样的时候，跑到临边的孔里的，当然了这种可能非常小，但是也是存在的，希望也能注意一下。 最后建议，加单一引物作对照，即加一对引物中的一条，确认是不是模板的问题。 好运。 |
7楼2011-05-26 15:39:13
yabxxh
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2楼2011-05-26 10:34:16
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