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116093626

新虫 (小有名气)

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[交流] 双元表达载体农杆菌EHA105

我想用农杆菌EHA105构建双元表达载体，我手上现在有pcambia1301，和空的农杆菌EHA105，是不是还需要一个带有Vir基因的辅助质粒。将1301和辅助质粒一起转到农杆菌里？
多谢大家!

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1楼 2011-05-25 20:27:08

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XOooZzz

银虫 (小有名气)

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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

2484603楼: Originally posted by Bella0224 at 2013-03-13 17:02:20
我也在做利用农杆菌的双元表达载体，请问这位虫友，我是否也一样要把我的目的基因克隆岛一个含有启动子的载体上呢？这个载体怎么选择呢？还是有常用的，还是都可以呢？

之后将启动子切下连接到我的另外含T-DNA的 ...

朋友挖得一手好坟...
你的基因是要做什么用的呢？超表达？在特定组织表达？你的目标植物是什么？
最普通的情况是，让一个基因在拟南芥里面超表达。这样直接改造常用的pCAMBIA1301就可以了，通过酶切连接的方法用这个基因的cds替换掉pCAMBIA1301的GUS编码区，然后用这个改造后的载体转化eha105，再用eha105转拟南芥。
vir什么的不用管。eha105里面本身就有。

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7楼2013-03-14 17:13:53

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咸鱼

金虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★ ★ ★
116093626(金币+1):谢谢参与
jhu132llh(金币+5, EPI+1): 是滴，鼓励积极帮助新虫 2011-05-26 09:27:05

引用回帖:

Originally posted by 116093626 at 2011-05-25 20:27:08:
我想用农杆菌EHA105构建双元表达载体，我手上现在有pcambia1301，和空的农杆菌EHA105，是不是还需要一个带有Vir基因的辅助质粒。将1301和辅助质粒一起转到农杆菌里？
多谢大家!

不需要，你需要将你的基因先克隆到一个有启动子的载体上，然后将启动子一起切下来连接到pCambia1301上，然后转化EHA105即可。因为1301在多克隆位点前无启动子。

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