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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR阴性对照假阳性问题
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p2011

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by joyfulnoise at 2011-05-24 15:45:15:
实验用的枪，手套什么的用乙醇擦过了没？
还有换加样的场所 配mix和加模板在不同的地方==

没有，但是我每天都会用新手套，请问一下这样也要用乙醇擦吗？如果用乙醇擦过后会不会对PCR结果有影响？
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11楼2011-05-25 10:05:56
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joyfulnoise

荣誉版主 (知名作家)

懒人一枚~

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-05-25 12:12:19
p2011(金币+10): 2011-05-25 14:56:36
引用回帖:
Originally posted by p2011 at 2011-05-25 10:05:56:
没有，但是我每天都会用新手套，请问一下这样也要用乙醇擦吗？如果用乙醇擦过后会不会对PCR结果有影响？

要的
不会有影响 这些是我们组总结出来的
发展到后来 污染太严重 我们用稀次氯酸钠擦 都不用酒精了
还有配mix的地方真的还要和加模板的地方分开

一般我是戴第二层PE手套加模板 加完以后放到机器里面 扔掉PE手套再去放抢啊以及之前的试剂之类的

深受污染痛苦的偶以及组员们总结出来的有效办法
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12楼2011-05-25 10:25:08
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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-05-25 12:12:11
引用回帖:
Originally posted by p2011 at 2011-05-24 10:42:49:
最近用文库做PCR时，发现阴性对照出现了假阳性结果，于是更换了所有试剂，但是假阳性结果依然存在，然后再度更换所有试剂，假阳性结果仍然存在。不知道是什么原因导致的了，希望各位高手指点。

这个一定是污染的问题了，试剂一般是没有问题的，但通常都会往这方面想，如果是试剂问题，连假阳性都不会有，所以肯定是污染问题，而且污染的问题还是比较严重的，用75%的乙醇把操作台彻底擦一遍，并用紫外灯照射1-2h，相信就没什么问题的，关键是我也有这样的经历，也是换试剂的都不管用，最后彻底大消毒了下就OK了~赶紧试试~
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13楼2011-05-25 10:57:34
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墨池

银虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by p2011 at 2011-05-24 10:42:49:
最近用文库做PCR时，发现阴性对照出现了假阳性结果，于是更换了所有试剂，但是假阳性结果依然存在，然后再度更换所有试剂，假阳性结果仍然存在。不知道是什么原因导致的了，希望各位高手指点。

想问楼主，后来你那个假阳性问题怎么解决的？
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阳光暖暖的，心情暖暖的，努力做个精致的女人！
14楼2011-10-21 14:59:11
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zchenglong

新虫 (初入文坛)
同样的问题困扰中，以前一直很好，做着做着就出现假阳性
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15楼2011-11-30 21:18:25
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ncusk

新虫 (初入文坛)
楼主怎样解决这个问题的
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16楼2012-02-14 09:26:14
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lyqifeih

新虫 (小有名气)
silicare(金币+3): 谢谢参与 2012-02-20 12:41:34
你肯定是出现了气溶胶污染，我们实验室出现过这样的问题。我在超净台也做PCR，对照也出现条带。除非你PCR分区，加样、PCR、跑胶分区，或者更换引物。气溶胶污染主要元凶是你经常用一对PCR，PCR完了之后电泳，这样你 就肯定有污染。
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刚进入神经生物和电生理
17楼2012-02-20 09:26:49
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lyqifeih

新虫 (小有名气)
补充：不更换不同长度的引物，只换试剂是没有用的，并且同一对引物PCR电泳后，不注意3~4次就会出现同样的污染。我们实验室现在分子直接叫停了，不做了，等3月份重新搬家。
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刚进入神经生物和电生理
18楼2012-02-20 09:29:52
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
PCR假阳性通常有三种

1，错配
2，气溶胶
3，试剂污染，最常见的是taq酶，taq酶中含义大量宿主核酸，这个是不争的事实

你可以从这三方面考虑一下设计一些对照实验
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19楼2012-02-20 12:43:10
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p2011

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by lyqifeih at 2012-02-20 09:29:52:
补充：不更换不同长度的引物，只换试剂是没有用的，并且同一对引物PCR电泳后，不注意3~4次就会出现同样的污染。我们实验室现在分子直接叫停了，不做了，等3月份重新搬家。

谢谢你的回答，我们当时的确是气溶胶污染导致的！
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20楼2012-02-21 09:08:47
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