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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切切出了5条条带
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zwlr116812

金虫 (正式写手)

[求助] 双酶切切出了5条条带

构建好重组子后，转进大肠杆菌，然后挑取单菌落，提取质粒，分别单酶切和双酶切，单酶切只有一条条带，而双酶切有好几条，这是怎么回事，请各位高手指教
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1楼 2011-05-23 19:34:35
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erryzhen

禁虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-05-23 20:20:41
本帖内容被屏蔽
2楼2011-05-23 20:00:05
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deblway

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 鼓励交流 2011-05-23 22:21:44
zwlr116812(金币+1): 谢谢 2011-05-24 08:48:13
5条带？这五条带里是否有你目的片段大小的带？抑或两条小小于目的片段的带？单酶切是否是两个酶分别都单切了？如果两个酶都单切了，分别都是一条带的话，应该是酶的量不够或者是质粒量大或者是酶切时间短。。建议分别用两个酶都单切一次。。感觉上个图可能更好分析些，告知目的片段大小，才更好解决问题。。。
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海贼王！哥当定了。。。。
3楼2011-05-23 21:37:09
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
看了条带大小或者电泳图才好解释的。
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4楼2011-05-23 22:52:41
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zwlr116812

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-05-23 22:52:41:
看了条带大小或者电泳图才好解释的。

从右往左，分别单双单双切的，目的片段是700多bp,载体是6.7kbp
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5楼2011-05-24 08:54:07
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vonsun

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

zwlr116812(金币+1): 谢谢 2011-05-25 14:17:20
用的什么酶，分析一下酶切位点，还有酶的星号活性
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6楼2011-05-24 12:13:48
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zwlr116812 at 2011-05-24 08:54:07:
从右往左，分别单双单双切的，目的片段是700多bp,载体是6.7kbp

marker大小也说明下
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7楼2011-05-24 12:16:37
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

zwlr116812(金币+1): 弄清楚了 是另一个酶失效了 2011-05-25 14:16:57
一个酶切一条带，两个酶切五条带，那就是说明，另外一个酶的问题
做另外一个酶的单酶切 看看几条带
遇到过这种情况，看看有没有你的目的条带
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8楼2011-05-25 03:56:05
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by erryzhen at 2011-05-23 20:00:05:
五条带？？没见过！
没切开的质粒 半开环的质粒 切开的质粒 还有目的片段这才4条带啊！

不会还有条超螺旋吧
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人生最黑暗的时光终于过去了
9楼2011-07-12 13:58:19
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你必须点一个未酶切的质粒，和单双酶切一起比较，正常的单酶切的位置应该在质粒的上面，双酶切比单酶切低，你的自然就是低700bp。
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10楼2012-05-21 16:46:27
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