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caojinxuan银虫 (正式写手)
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[求助]
求助微生物问题
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请教各位一个问题，提取细菌基因组所用的菌液的OD600值需要在什么范围？ 我的菌液的OD600刚刚过1.5，还能用来进行基因组提取吗？ |
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2楼2011-05-22 18:05:50
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4楼2011-05-23 01:46:47
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13楼2011-05-26 00:19:14
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+5, EPI+1): 解答的很详细！！！ 2011-05-28 17:25:21
rainwander(金币+5, EPI+1): 解答的很详细！！！ 2011-05-28 17:25:21
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回版主：菌死了，DNA不一定在，虽然被释放到培养液中，但同时很多关于细胞自溶的蛋白质也一样被释放，所以DNA也会被降解的，至于降解到什么程度就很难说了。同理，细胞碎片垃圾一大堆，这时候提取DNA就难说了，虽然说有试剂盒之类的东西，但是提取效率和提取到的DNA片段好不好，纯不纯，就给实验结果增加了变数。也许你提取过，你知道 对于 hanguorui110 的回复，我想补充如下： 不同的细菌其生长期最高所能达到的OD值是不同的，有的能超过2，有的可能连0.2都达不到，说不准楼主的菌OD值在多少的时候就处于对数期。 楼主用的波长是600，hanguorui110用的波长是540，不知道是不是无论是600还是540，最佳的测量值都是在0.2~0.8之间？hanguorui110的表格文件里，OD540测定得到1.4，经过2倍稀释之后得到0.7，乘以2之后还是1.4，说明在540nm下的线性范围可以达到1.4，而不是“最佳的测量值都是在0.2~0.8之间”。 稀释的意思是当样品的吸光值超过线性读数范围的时候，用溶液来稀释，这个溶液应该用楼主的培养基，不能用水，因为培养基本身也可能会有有颜色的物质。 hanguorui110用的是DNS法测定还原糖（葡萄糖），每个测定用浓度只有一个操作平行，没有标准偏差，应该要设定三个平行，计算标准偏差。 DNS需要在碱性环境下才能与还原糖起反应，实际上在测定酶降解底物产生还原糖的时候，酶的反应环境里需要用缓冲液保持一定的pH值（如柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液），酶液里也可能存在其它化合物消耗氢氧化钠（如疏水层析之后收集液里含有硫酸铵），严重的时候会最终使得pH值不为碱性，所以表格文件里的“3mL DNS 相应与5mg葡萄糖反应，即0.5mLDNS能与0.83mg葡萄糖（还原糖反应）”里的“0.83mg葡萄糖”在测定酶活力的时候就不一定了，可能明明有葡萄糖，但就是测定不出来。另外葡萄糖和还原糖不对等，葡萄糖和麦芽糖都是还原糖，同样是有一个还原性末端，但分子量不一样。 终于打完了 |
15楼2011-05-26 20:00:51
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16楼2011-05-26 20:09:20
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