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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求助微生物问题
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caojinxuan

银虫 (正式写手)

[求助] 求助微生物问题

请教各位一个问题，提取细菌基因组所用的菌液的OD600值需要在什么范围？
我的菌液的OD600刚刚过1.5，还能用来进行基因组提取吗？
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1楼 2011-05-22 13:58:08
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
用分光光度计还是酶标仪测的
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2楼2011-05-22 18:05:50
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
还要不老才更好
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4楼2011-05-23 01:46:47
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
scelab(金币+2): 菌死了，DNA还在 2011-05-26 13:19:27
长得太老了，一大堆老细胞死细胞细胞碎片就不好玩了，还是嫩一点的好。我也不知道你的细菌能长到OD多少才不算老，只能提醒一下。
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13楼2011-05-26 00:19:14
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+5, EPI+1): 解答的很详细！！！ 2011-05-28 17:25:21
引用回帖:
Originally posted by hanguorui110 at 2011-05-26 11:15:51:
紫外分光光度计最佳的测量值是在0.2~0.8之间，
最好能控制在0.5是最好的，我用紫外测含糖量的一些方法你看看，还有就是改变一下标曲，把标曲扩大上紫外测。到时候你就把我要测得糖变成你要测得样品，标曲就按你的 ...

回版主：菌死了，DNA不一定在，虽然被释放到培养液中，但同时很多关于细胞自溶的蛋白质也一样被释放，所以DNA也会被降解的，至于降解到什么程度就很难说了。同理，细胞碎片垃圾一大堆，这时候提取DNA就难说了，虽然说有试剂盒之类的东西，但是提取效率和提取到的DNA片段好不好，纯不纯，就给实验结果增加了变数。也许你提取过，你知道

对于  hanguorui110  的回复，我想补充如下：
不同的细菌其生长期最高所能达到的OD值是不同的，有的能超过2，有的可能连0.2都达不到，说不准楼主的菌OD值在多少的时候就处于对数期。

楼主用的波长是600，hanguorui110用的波长是540，不知道是不是无论是600还是540，最佳的测量值都是在0.2~0.8之间？hanguorui110的表格文件里，OD540测定得到1.4，经过2倍稀释之后得到0.7，乘以2之后还是1.4，说明在540nm下的线性范围可以达到1.4，而不是“最佳的测量值都是在0.2~0.8之间”。

稀释的意思是当样品的吸光值超过线性读数范围的时候，用溶液来稀释，这个溶液应该用楼主的培养基，不能用水，因为培养基本身也可能会有有颜色的物质。

hanguorui110用的是DNS法测定还原糖（葡萄糖），每个测定用浓度只有一个操作平行，没有标准偏差，应该要设定三个平行，计算标准偏差。

DNS需要在碱性环境下才能与还原糖起反应，实际上在测定酶降解底物产生还原糖的时候，酶的反应环境里需要用缓冲液保持一定的pH值（如柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液），酶液里也可能存在其它化合物消耗氢氧化钠（如疏水层析之后收集液里含有硫酸铵），严重的时候会最终使得pH值不为碱性，所以表格文件里的“3mL DNS 相应与5mg葡萄糖反应，即0.5mLDNS能与0.83mg葡萄糖（还原糖反应）”里的“0.83mg葡萄糖”在测定酶活力的时候就不一定了，可能明明有葡萄糖，但就是测定不出来。另外葡萄糖和还原糖不对等，葡萄糖和麦芽糖都是还原糖，同样是有一个还原性末端，但分子量不一样。

终于打完了
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15楼2011-05-26 20:00:51
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
scelab版主可能提取过，楼主可以私下问问
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16楼2011-05-26 20:09:20
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