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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » issr的条带不清晰
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xdrlll

新虫 (初入文坛)

[求助] issr的条带不清晰

我做issr，p出来的条带很多但是不够清晰是什么原因呢？
还有就是现在DNA有降解，条带不太亮没有拖尾，还能用吗？如果能用应该稀释多少倍比较好呢？
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1楼 2011-05-15 16:30:25
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passingby

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-16 14:44:13
xdrlll(金币+1): 2011-05-17 18:08:01
我听同学说ISSR是一种很不稳定的分子标记，所以还是要反复实验才能得出结果，具体我也不太懂啦，只能说这么多，期待高手给你解答
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不能再走一步算一步了，我要计划好每一步该怎么走，起码要做到心中有数！
2楼2011-05-16 12:49:58
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很有经验！ 2011-05-16 16:58:23
ISSR一般对DNA的质量要求也不是太高
你的DNA没有拖尾，你是如何判断降解的，条带不亮并不是降解，只是浓度不够大，这个问题不大
你说你P出来的条带不太亮，可能跟PCR条件有关系，ISSR的PCR和退火温度有相关性，要筛选，可以使用降落PCR增加特异性，以增大亮度
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3楼2011-05-16 15:12:36
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xdrlll

新虫 (初入文坛)
一般这样的情况还能p出来了吗，我应该稀释多少倍啊，我做了10、50、100的梯度都没有带以前做正交的时候就是用的这个引物和模板啊，还有我是用TE溶解的DNA。谢谢各位的指点啊
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4楼2011-05-16 21:35:43
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xdrlll

新虫 (初入文坛)
忘了说了我们没有梯度pcr仪所以做退火温度难度有点大一般这样的情况应该多大设一个梯度呢
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5楼2011-05-16 21:38:36
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zhangyonghu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 欢迎新虫交流 2011-05-16 23:06:56
哥啊！你稀释的太多了！
p的产物不好，你应该调体系，尤其是退火温度，和酶的量
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6楼2011-05-16 21:47:13
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