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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR3‘端扩增
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linyanfei

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR3‘端扩增 已有4人参与

请各位大侠帮忙啊，我连续做了好几次3’端得扩增，用的试剂盒，都不行，到底怎么回事啊？我感觉提取的RNA质量还行，不知道哪里出了问题。我是新手，拜托老手们指导一下！谢谢啦
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1楼 2011-05-13 22:09:30
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linyanfei

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shizishanshang at 2011-05-16 16:11:27:
3'很容易啊,如果用试剂盒的,都是一次就出来的.
5'就没有那么好做了

嗯，就是用的试剂盒，不过还好，失败了几次后终于扩出来了，呵呵，继续加油啊！
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11楼2011-05-16 21:58:35
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
这个要一步一步检查了，既然觉得RNA不好，不如重新做。
话说，无图无真相啊~
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2楼2011-05-14 00:15:41
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linyanfei

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-05-14 00:15:41:
这个要一步一步检查了，既然觉得RNA不好，不如重新做。
话说，无图无真相啊~

呵呵，首先谢谢啦！我是觉得RNA质量还行，有很清晰的28s,18s和5s.然后反转录的时候也是按照说明书上的步骤来的，但是还是不行。下次做的时候我打算先在60度保温十分钟，看一下RNA有没有降解，如果是降解了做后面的似乎都是白做！
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3楼2011-05-14 20:00:15
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by linyanfei at 2011-05-14 20:00:15:
呵呵，首先谢谢啦！我是觉得RNA质量还行，有很清晰的28s,18s和5s.然后反转录的时候也是按照说明书上的步骤来的，但是还是不行。下次做的时候我打算先在60度保温十分钟，看一下RNA有没有降解，如果是降解了做后 ...

有没有试过拿cDNA去扩内参基因？这个是检验cDNA质量常用的方法。
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4楼2011-05-15 01:09:07
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