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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖甜到憂傷

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【答案】应助回帖

baby1_9253344(金币+1): 等你的回答等了好久了，泪奔ing，3Q 2011-05-16 08:35:34
silicare(EPI+1): 2011-05-16 08:41:06

1，酵母化学转化过程中有哪些关键步骤需要特别注意的？
只做过电转化，化学转化的话关键步骤肯定是感受态的制备了，由于酵母细胞壁较厚，化学转化比较难，建议用原生质法化。

2，选择性平板长出来的东西怎么判断是阳性酵母株还是杂菌？一般培养几天能出菌落？
看你是抗生素筛选还是缺陷型筛选了，一般缺陷型筛选比较准确，长出来的基本是阳性，抗生素筛选出假阳性概率要高些。要想判断是否为阳性，都应该提取质粒或者基因组进行验证。酵母比大肠长的慢，2-3d出单菌落。
3，如果有阳性菌落，如何鉴别其成功转入？提质粒跑电泳还是PCR?
看你质粒是负载型的，还是整合型的，负载型的质粒，能提取出来，只是酵母的质粒提取出来浓度会很低，电泳基本看不见，但是做PCR验证还是没有问题的，如果想再做酶切验证，可以发转大肠，再提质粒，再酶切验证。
整合型质粒，只有提取酵母基因组，然后PCR验证。

4，听说酵母质粒有的提不出来，会被整合，那如何知道我转的质粒是会整合的那种还是可以提出来的那种？我的是P416GPD
看是否是负载性的，你找该质粒是否有酵母类型的复制起始位点，比如2u,CEN等。