24小时热门版块排行榜    

查看: 1579  |  回复: 5
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xjj5287

铁虫 (初入文坛)

[求助] 基因克隆问题~~

请教:一段目的基因克隆于pGEM-T easy  vector  后,经测序具有claI和xbaI酶切位点,但是进行酶切时不能切开得到目的基因,这是怎么回事?谢谢。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3, EPI+1): 2011-05-11 17:03:19
1:测序结果是否可靠?这两个酶切位点是只有一个吗?
2:双酶切是否完全?酶切体系和时间都会影响你的酶切效果;
3:能不能直接上图,是压根没有切动还是酶切不完全?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-05-11 16:49:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

xiajungang

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): good 2011-05-11 13:46:23
先保证你的限制酶没问题,然后就是考虑重组子在宿主菌里是不是被甲基化了?试试甲基化酶基因缺失的宿主菌
吃苦耐劳,勇于创新,乐观热情,积极向上!
2楼2011-05-11 13:09:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by xjj5287 at 2011-05-11 10:12:13:
请教:一段目的基因克隆于pGEM-T easy  vector  后,经测序具有claI和xbaI酶切位点,但是进行酶切时不能切开得到目的基因,这是怎么回事?谢谢。。。

不知道你用的什么感受态细胞,如果是top10的话是XbaI是很容易被甲基化的,你可以先通过pcr扩增验证是否含有目的片段,然后转化JM110感受态细胞后提质粒酶切得到目的基因
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-05-11 14:28:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xjj5287

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-05-11 14:28:10:
不知道你用的什么感受态细胞,如果是top10的话是XbaI是很容易被甲基化的,你可以先通过pcr扩增验证是否含有目的片段,然后转化JM110感受态细胞后提质粒酶切得到目的基因

PCR有目的片段,测序也是对的,用的是DH5A感受态,如果是被甲基化了,应该怎么办啊?
4楼2011-05-11 16:42:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289求调剂 +15 硕星赴 2026-03-23 15/750 2026-03-26 02:16 by BruceLiu320
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 312求调剂 +5 上岸吧ZJY 2026-03-22 7/350 2026-03-25 22:20 by 544594351
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 11/550 2026-03-25 16:17 by 87639
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生(材料、化学、电化学,环境) +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿深大,0703化学,总分302,求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
信息提示
请填处理意见