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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序信号不够？
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li1977li

金虫 (小有名气)

[求助] 测序信号不够？

T-A克隆一个1300bp的目的基因经蓝白斑筛选后挑单个白菌落摇菌后手工提质粒同时做菌落PCR，质粒酶切后和菌落PCR均阳性，吸20ul质粒送上海生工测序，今说信号不够，不知是什么意思？该怎办？求解！谢谢！
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1楼 2011-05-09 19:50:50
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-10 08:39:40
送PCR产物去测序。。。
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2楼2011-05-09 23:39:01
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-05-10 08:39:51
测序结果一般会发生您的质粒不够纯 或者浓度不够高

建议你把含质粒的菌平板划线法筛选单克隆菌株，再摇菌，提质粒，这样尽可能的获得较为纯的质粒
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3楼2011-05-09 23:42:05
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主
★
dhd997(金币+1): 什么意思？ 2011-05-10 08:40:08
测序公司测不出来的后，经常会有那么几个接口
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千万不要因为走的太久，而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
4楼2011-05-09 23:45:32
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li1977li

金虫 (小有名气)
谢谢楼上的解惑或建议，昨晚重摇菌今送菌液再送去测看看。
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5楼2011-05-10 09:34:47
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-11 07:55:55
引用回帖:
Originally posted by li1977li at 2011-05-09 19:50:50:
T-A克隆一个1300bp的目的基因经蓝白斑筛选后挑单个白菌落摇菌后手工提质粒同时做菌落PCR，质粒酶切后和菌落PCR均阳性，吸20ul质粒送上海生工测序，今说信号不够，不知是什么意思？该怎办？求解！谢谢！

这个是他们的借口，应该是实验过程中出现了什么差错，有可能把样给混了或者弄丢了
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
6楼2011-05-10 10:06:54
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小皮球邓

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
li1977li(金币+1): 2011-05-10 14:09:24
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-11 07:56:14
我们一般测序都是拿菌去测序，公司自己提质粒测序。信号不好还有一种可能是你做PCR回收的时候出现了一些小问题。
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坚持就是胜利！
7楼2011-05-10 12:34:53
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-11 07:56:27
公司一般是会扩增菌液的，信号不够可以多摇一会嘛，应该就是借口！
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8楼2011-05-10 14:26:59
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-11 07:56:40
我们一般是自己提了质粒再送去测序的。
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9楼2011-05-10 17:53:26
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