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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于western blot转膜
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烂铁

金虫 (小有名气)

[交流] 关于western blot转膜

最近开始做western blot，但是转膜这一步总是不成功，我用的是半干式转膜法，180mA和1h左右，100mA1.5h都试过了，根据转膜仪上面得说明，转膜时间已经足够了，可是丽春红染色后还是没有条带。
我用的滤纸是普通的滤纸（不是3mm滤纸），这会有影响么？另外我用的PVDF膜已经有一段时间了，这个会不会存在过期的问题？
希望大家帮助，谢谢！！
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1楼 2011-05-09 10:51:13
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noah1020

新虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by 烂铁 at 2011-05-17 08:57:55:
蛋白从20多到100多都有啊，我的目的蛋白是66kD，但是转完后膜上面一条带都没有，干干净净的，这就不是蛋白大小的问题了吧，如果干转的话，一般电流设置多大啊？我的是干转，需要加冰冷却么？

要是干转的话，一般可以不加冰的~如果恒流没有做出来条带，那就建议你使用恒压法试试~我转膜的时候恒流是200mA，恒压就用60V~适当延长转膜时间~我当时做40kD蛋白时候，转膜时间到3h都可以的~
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13楼2011-05-17 11:31:13
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你的膜活化了吗？
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2楼2011-05-09 11:57:24
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烂铁

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by elvias at 2011-05-09 11:57:24:
你的膜活化了吗？

恩，先用甲醇浸泡，然后用转膜缓冲液浸泡的
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3楼2011-05-09 12:01:16
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
烂铁(金币+5): 2011-05-09 14:19:25
西瓜(金币+3): 热心噢 2011-05-09 17:55:41
引用回帖:
Originally posted by 烂铁 at 2011-05-09 12:01:16:
恩，先用甲醇浸泡，然后用转膜缓冲液浸泡的

那你有没有预染marker，你可以用一下，看看是否是转膜这步出了问题。
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4楼2011-05-09 12:29:58
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