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烂铁

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[交流] 关于western blot转膜

最近开始做western blot，但是转膜这一步总是不成功，我用的是半干式转膜法，180mA和1h左右，100mA1.5h都试过了，根据转膜仪上面得说明，转膜时间已经足够了，可是丽春红染色后还是没有条带。
我用的滤纸是普通的滤纸（不是3mm滤纸），这会有影响么？另外我用的PVDF膜已经有一段时间了，这个会不会存在过期的问题？
希望大家帮助，谢谢！！

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1楼 2011-05-09 10:51:13

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noah1020

新虫 (小有名气)

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烂铁(金币+5): 2011-05-17 08:55:13

LZ的目的蛋白分子量是多少啊？转膜时间是根据分子量来订的~如果分子量小于20kD的话，转膜时间要很短，不然蛋白就透过去了；蛋白分子量要是大于80的话，要适当的延长转膜时间，要不转膜不完全~还有可能就是在转膜的过程中由于产生了大量的热，导致蛋白降解~一般我转膜的时候都在下面放一盆冰来降温~要不就把转膜槽放到冰箱冷藏室里，降低电压延长转膜时间~
一般蛋白上样量够的话，丽春红染10min应该可以看到条带~