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475502411

铜虫 (著名写手)

[交流] 抽提质粒

大家帮忙看看我抽的这个质粒图，看我的质粒有没有断开？因为我每次抽提都书两条以上的条带，没有单条带的，很郁闷。谢谢各位虫友！！！！
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1楼 2011-05-05 14:21:44
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yuliansheng

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
475502411(金币+2): 2011-05-07 15:58:21
dhd997(金币+5, EPI+1): 够热心 2011-05-07 17:46:03
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-05-05 14:21:44:
大家帮忙看看我抽的这个质粒图，看我的质粒有没有断开？因为我每次抽提都书两条以上的条带，没有单条带的，很郁闷。谢谢各位虫友！！！！

正常质粒被提取后，会有三种形态：分别是超螺旋形、开环型、线型。三种质粒因结构不同，在凝胶电泳时的速度也会不同，超螺旋形跑的最快，其次是线型，最后是开环型。具体相关资料如下：

      从细菌中分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细胞;分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可以破坏菌体细胞壁,十二烷基磺酸钠(SDS)和Triton X-100可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS或Triton X-100处理后,细菌染色体DNA会缠绕附着在细胞碎片上,同时由于细菌染色体DNA比质粒大得多,易受机械力和核酸酶等的作用而被切断成不同大小的线性片段。当用强热或酸、碱处理时，细菌的线性染色体DNA变性,而共价闭合环状DNA(Covalently closed circular DNA，简称cccDNA)的两条链不会相互分开，当外界条件恢复正常时，线状染色体DNA片段难以复性,而是与变性的蛋白质和细胞碎片缠绕在一起,而质粒DNA双链又恢复原状,重新形成天然的超螺旋分子,并以溶解状态存在于液相中。
      在细菌细胞内,共价闭环质粒以超螺旋形式存在。在提取质粒过程中，除了超螺旋DNA外，还会产生其它形式的质粒DNA。如果质粒DNA两条链中有一条链发生一处或多处断裂,分子就能旋转而消除链的张力,形成松驰型的环状分子,称开环DNA(Open circular DNA, 简称 ocDNA)；如果质粒DNA的两条链在同一处断裂,则形成线状DNA(Linear DNA)。当提取的质粒DNA电泳时,同一质粒DNA其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分子的泳动速度快。
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11楼2011-05-07 15:54:36
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yuxia82012

木虫 (著名写手)
★
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475502411(金币+1): 2011-05-05 14:33:30
这个没什么关系的，不影响下一步实验的
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2楼2011-05-05 14:22:55
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
提的质粒一般也不会只有一条带
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3楼2011-05-05 14:29:35
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xuguanghai

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-05 16:51:01
475502411(金币+2): 2011-05-07 15:52:12
看你用什么方法裂解了
一般用碱裂解的话就是2-3条带，质粒，复制的中间体，开环的质粒，一般质粒比例只要大于85%就可以后续试验了
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4楼2011-05-05 15:02:13
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