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794378428

银虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR产物与pMD 19Tsimple连接的问题

我的PCR纯化产物为什么pMD 19Tsimple连接不上啊,求指导
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fuchange918

木虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by aegeand at 2011-05-08 18:28:39
顺便把我的烦恼和楼主一起分享吧。

我的目的片段在3.4 左右,LA扩增后,割胶回收目的片段,电泳检测回收结果,用最普通的taq加A尾(听说LA的加尾效率不是很高),用PCR产物纯化试剂盒纯化,在电泳检测产物,测浓 ...

请问您现在连上了吗?我也是一样的问题,愁死了
19楼2014-07-15 16:02:54
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查看全部 20 个回答

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 一条一金币,呵呵 2011-05-04 11:05:32
794378428(金币+1): 2011-05-04 21:03:10
794378428(金币+1): 2011-05-04 21:03:33
1:连接体系的问题,连接时间呢?
2:质粒和你的目的基因酶切是否完全?
3:感受态细胞又如何?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-05-04 08:52:31
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zlu520

至尊木虫 (职业作家)

限制人

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 有道理 2011-05-04 11:05:48
酶如果正确的话,条件一定要合适啊,时间等。。
无完人!
3楼2011-05-04 10:20:07
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liulinlin123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 对啊 2011-05-04 11:05:57
可以考虑一下 链接时增加热击  65度5min
4楼2011-05-04 10:30:56
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