24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

794378428

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1151.8
散金: 106
红花: 8
帖子: 148
在线: 202.3小时
虫号: 1178316
注册: 2010-12-27
专业: 食品加工技术

[求助] 关于PCR产物与pMD 19Tsimple连接的问题

我的PCR纯化产物为什么pMD 19Tsimple连接不上啊，求指导

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有116人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

1楼2011-05-04 08:32:32

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

aegeand

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 122.1
帖子: 105
在线: 13.8小时
虫号: 212827
注册: 2006-03-09
专业: 基因组学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 多谢分享经验~再找找原因吧。祝实验顺利哦！ 2011-05-08 19:54:43

顺便把我的烦恼和楼主一起分享吧。

我的目的片段在3.4 左右，LA扩增后，割胶回收目的片段，电泳检测回收结果，用最普通的taq加A尾（听说LA的加尾效率不是很高），用PCR产物纯化试剂盒纯化，在电泳检测产物，测浓度。

由于片段比较长，所以在连接之前将产物放到65度15分钟，希望他能够完全伸展，然后连接。问题就出在下面：我分别用fermentas T4连接酶，pEASY-T和pMD19连接系统，载体与插入片段的比例1：3，1：1都试过，平板上也能长出白斑，可是每题提完质粒，一鉴定，都是空载体，郁闷的要死，连接2个月都没有成功，已经到了崩溃的边缘。

你不是最背的。