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毕赤酵母扩大培养需要提供大量氧气吗？
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请问，使用MGY扩大培养毕赤酵母，意图达到较高的菌浓度，这个时候需要给毕赤酵母提供大量氧气吗？ 求各位对发酵表达有经验的朋友指点一下，多谢！ |
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5楼2011-05-07 09:57:18
2楼2011-04-26 16:25:07
3楼2011-04-26 22:09:49
susizheng
木虫 (著名写手)
我們是糖 甜到憂傷
- MicEPI: 1
- 应助: 130 (高中生)
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- 性别: GG
- 专业: 有机合成
【答案】应助回帖
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酵母表达过程中对氧的需求比原核表达系统严格的多，如果想达到很高的菌浓，大量供养肯定是必需的。 cDNA序列中除了CDS是编码区外其它部分就是内含子了，内含子有什么作用，我就不帮你百度，不帮你翻书了。 在设计引物时应该从第一个碱基开始还是从信号肽开始，还是从CDS的第一个碱基开始？ （这个问题我真看不懂你想问什么？因为前半句你没说清楚从什么的第一个碱基开始，后半句你问是否从CDS的第一个碱基开始，因此我推断你想问在扩增的时候是否应该除掉信号肽。） 个人认为，最好除掉信号肽，因为带着你的基因信号肽，在毕赤酵母里面表达也不定能够得到识别并进行正确剪切，没有剪切的话，蛋白前面多一段短肽说不定还影响酶活。 如果想分泌表达的话，毕赤酵母有相应的分泌型表达载体。 个人对毕赤酵母也只能算是半吊子，回答如有不当，还望楼主见谅。 另外，这个坛子生物方面做表达的，大部分用的原核表达系统，做真核表达就我这两年来看，不多，因此楼主可能短时间没多少人回复。 PS:个人认为楼主问问题态度不大好，如果觉得问题这么简单，又何必来问。发帖后，才几个小时没有得到回复就发牢骚，可不是搞科研的态度。 为什么总是觉得在这里得到别人的帮助是必需的，有没有想过在这里帮助下别人，看楼主的发帖数，在这里当不是个太热心的人吧。 |
4楼2011-04-28 19:16:24
