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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆基因和载体连接后转化至大肠杆菌，为什么每次涂板都是空平板没有菌落？
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zhaoxinrui0511

金虫 (小有名气)

[求助] 克隆基因和载体连接后转化至大肠杆菌，为什么每次涂板都是空平板没有菌落？

小弟快崩溃了，请大家帮帮忙：
目的基因经PCR扩增后（引物上分别加入：Nco I和Xba I酶切位点）和T载体相连，经测序验证序列唔错，之后从T载体上用Nco I和Xba I双酶切重新获得了目的基因（酶切产物的纯化采用宝生物的胶回收），同时将可以在大肠杆菌中复制存在的乳酸菌载体pNZ8148用Nco I和Xba I双酶切（酶切产物的纯化采用宝生物的胶回收），按载体：目的片段（1：4）连接后转化至大肠杆菌，为什么每次涂板都是空平板没有菌落？（但我直接转化pNZ8148空载体每次都可以张很多菌落）。
     小弟着急毕业，请各位大哥帮帮忙吧。
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1楼 2011-04-24 18:42:36
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liuyuxiu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2011-04-24 19:49:19
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beibei9535

荣誉版主 (职业作家)

晕晕小版主~ 姑娘你好！

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励发帖应助。 2011-04-24 21:14:01
不能纯粹俺1:4计算！
要按浓度那个公式计算！
赞一下(1人) 回复此楼
最好的年龄是，那一天，终于知道并且坚信自己有多好，不是虚张，不是夸浮，不是众人捧，是内心明明澈澈知道：是的，我就是这么好。
2楼2011-04-24 18:47:04
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zhaoxinrui0511

金虫 (小有名气)
什么公式呢？能告诉我吗？麻烦你了
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-24 19:31:10
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roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-04-24 20:41:24
zhaoxinrui0511(金币+5): 2011-05-05 11:56:12
不应该一个都不长，而阳性对照很正常的，起码自连也会有的。
不知道LZ，切胶回收后电泳条带是不是过少。

另外请验证用两个内切酶，分别单切再自连后是否能有菌。

难道表达的蛋白如此毒性之烈，导致菌都死了。那就请降低背景表达
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-04-24 20:14:26
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查看全部 18 个回答
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