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melodyxin

铜虫 (小有名气)

[求助] 求问一个百思不得其解的问题!

在做某个纤维素酶基因的大肠杆菌胞内表达和毕赤酵母中的胞外表达,都实现了预期目标,可是在测定比活力(IU/mg)时发现一个奇怪的现象:

大肠杆菌表达为胞内,因此采用冻融破胞后,测定破胞液的总蛋白量,计算比活力;而毕赤酵母表达是胞外分泌,因此直接取发酵上清液测定总蛋白量计算比活力。计算结果,后者是前者的一半!

这个这么解释啊?一般来说,酵母表达体系不是更有利于外源基因的表达吗?怎么比活力反而会低于细菌呢?

P.S.该目的基因富含AT,来自真菌
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


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西瓜(金币+1): 鼓励下 2011-12-24 15:30:05
你的酵母表达前目的基因有没有测过序?会不会是基因突变了?
还有就是酵母表达时有没有做梯度筛选高拷贝?
勤奋、执着、专注,则无坚不破。
14楼2011-12-24 08:59:59
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