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琉璃儿

金虫 (小有名气)

[求助] 原位杂交样品怎么处理

高手:
      原位杂交的样品采集后需要用什么试剂出来一下,放到-80度中保存呢。
     原位杂交要注意什么呢?
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1.样品固定:通常用FAA,或4%多聚甲醛,4度过夜(勿超16h)
2.系列乙醇脱水、透明、置换、渗透、石蜡包埋。-20度保存(可达1年)

注意所有操作、试剂避免RNase污染。
3楼2011-04-22 08:23:24
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

用RNA保护试剂浸泡一下,采样时取成薄方片,便于切片
2楼2011-04-22 00:58:08
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by lixg at 2011-04-22 08:23:24:
1.样品固定:通常用FAA,或4%多聚甲醛,4度过夜(勿超16h)
2.系列乙醇脱水、透明、置换、渗透、石蜡包埋。-20度保存(可达1年)

注意所有操作、试剂避免RNase污染。

楼上正解
不过我们的固定哟暗示用4%PFA的时候最好是不要4度过夜
一般是4-5小时
4%多聚甲醛固定时间过长一般会残留醛基在组织中
对下一步实验造成很大的影响
并且多聚甲醛固定时间过长组织变脆
不利于包埋和切片
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
4楼2011-04-22 09:24:31
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-04-22 09:24:31:
楼上正解
不过我们的固定哟暗示用4%PFA的时候最好是不要4度过夜
一般是4-5小时
4%多聚甲醛固定时间过长一般会残留醛基在组织中
对下一步实验造成很大的影响
并且多聚甲醛固定时间过长组织变脆
不利于包埋 ...

跟楼上学习了,谢谢!
5楼2011-04-24 17:28:19
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