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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原位杂交样品怎么处理
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琉璃儿

金虫 (小有名气)

[求助] 原位杂交样品怎么处理

高手：
      原位杂交的样品采集后需要用什么试剂出来一下，放到-80度中保存呢。
     原位杂交要注意什么呢？
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1楼 2011-04-21 19:53:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixg

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1.样品固定：通常用FAA,或4%多聚甲醛，4度过夜（勿超16h）
2.系列乙醇脱水、透明、置换、渗透、石蜡包埋。-20度保存（可达1年）

注意所有操作、试剂避免RNase污染。
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3楼2011-04-22 08:23:24
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查看全部 7 个回答

forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

用RNA保护试剂浸泡一下，采样时取成薄方片，便于切片
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2楼2011-04-22 00:58:08
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by lixg at 2011-04-22 08:23:24:
1.样品固定：通常用FAA,或4%多聚甲醛，4度过夜（勿超16h）
2.系列乙醇脱水、透明、置换、渗透、石蜡包埋。-20度保存（可达1年）

注意所有操作、试剂避免RNase污染。

楼上正解
不过我们的固定哟暗示用4%PFA的时候最好是不要4度过夜
一般是4-5小时
4%多聚甲醛固定时间过长一般会残留醛基在组织中
对下一步实验造成很大的影响
并且多聚甲醛固定时间过长组织变脆
不利于包埋和切片
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
4楼2011-04-22 09:24:31
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-04-22 09:24:31:
楼上正解
不过我们的固定哟暗示用4%PFA的时候最好是不要4度过夜
一般是4-5小时
4%多聚甲醛固定时间过长一般会残留醛基在组织中
对下一步实验造成很大的影响
并且多聚甲醛固定时间过长组织变脆
不利于包埋 ...

跟楼上学习了，谢谢！
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5楼2011-04-24 17:28:19
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