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【求助】虾青素HPLC检测
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weichun
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[交流]
【求助】虾青素HPLC检测
我最近用自己浓缩的虾青素粗色素油做了一下虾青素液相分析检测,
色谱条件:C18柱,流动相:乙腈:水=95:5,检测波长是471nm,样品用甲醇溶解的。
但是出的谱图报告只是在2min时有个倒峰,其它什么东西都没有了,后来把检测波长换到281nm时就有一序列峰,但这肯定是其它物质,虾青素是在400多nm处吸收的。请问这是什么原因
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2011-04-17 10:08:06
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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议首先采用甲醇-水进行洗脱
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9楼
2013-07-02 11:45:42
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jiangchunyong(金币+1): 谢谢! 2011-04-17 14:51:27
weichun(金币+2): 2011-04-22 10:19:48
简单分析一下:
1、虾青素是在400多nm处吸收,为何检测波长选择471nm?选择虾青素的吸收波长,灵敏度不是更高么?
2、流动相(乙腈:水=95:5)。要知道乙腈的洗脱能力很强,这个比例下,保留性不同的物质分离效果不明显,且保留时间很短。
3、2min处的倒峰,是由于流动相或样品中物质的紫外吸收波长<检测波长引起的,也就是说,样品中紫外吸收波长小于471nm的物质,都可能会形成倒峰。
综上,我认为,471nm,乙腈:水=95:5下,样品在2min处洗脱下来,且以倒峰的信号表现出来。
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2011-04-17 13:30:53
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痴夷子皮
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karl2100(金币+1): 3Q 2011-04-21 19:06:35
weichun(金币+2): 2011-04-22 10:20:01
改善方法:
1、选择适合的检测波长。不确定可以先扫紫外。
2、调整流动相中乙腈比例(乙腈比例,慢慢调试),在合适的比例上可选择流动性使用缓冲盐,调pH等,达到分离目的。
3、样品用甲醇溶解,会有溶剂效应,可以改用流动相溶解。
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2011-04-17 13:35:51
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小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖
qinhy(金币+1): O(∩_∩)O谢谢~~~ 2011-04-21 18:59:52
weichun(金币+5): 2011-04-22 10:18:42
虾青素本身就在470nm左右有吸收的啊
流动相得改改,我看他们帮我检测时用的流动相有甲醇:二氯甲烷:乙腈:水,甲醇占85%了,其余三个比较少,自己找合适的比例吧,不能全说了
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2011-04-21 14:07:49
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