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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 【求助】真菌中已变性的蛋白质的提取方法
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小损样儿

铁杆木虫 (职业作家)

爱可口不爱百事
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
nono2009(金币+2, 食品EPI+1): 鼓励应助 2011-04-16 07:27:23
sweety: 回帖置顶 2011-12-30 09:22:35
首先准备以下几种试剂。配制裂解液：50 mmol/L Tris-HCl；2 mmol/L EDTA；100 mmol/L NaCl；0.5% TritonX-100，调pH至8.5~9.0备用。用前加入100 μg/mL溶菌酶，1 μl/mL的蛋白酶抑制剂PMSF。
将菌液在12 000×g，4 ℃下离心15 min收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤两遍，最后加入1 mL裂解液悬浮菌体。在冰浴中用超声波破碎仪破壁(工作时间:间歇时间=1:3)，超声15 min，随即离心(12 000×g，10 min，4 ℃)去除细胞碎片，得到无细胞提取物，里面富含蛋白质，通过试剂盒可以测定其中蛋白质的浓度。
另外补充一点：细胞破壁的方法可以还有通过反复冻融或者用磁力珠搅拌菌液。
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3楼2011-04-15 23:17:00
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