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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】酶的提取缓冲液的问题
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js_yangbin

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】酶的提取缓冲液的问题已有5人参与

最近看了一些蛋白质提取相关的文献，经常会看到类似于下面的一些描述：取20 g西兰花种子，用液氮研磨成粉末，加60 mL提取缓冲液(O.2 mol／L
Tris—HCI缓冲液，pH7.5，5％甘油，l mmo/L EDTA，3 mmol／L DTT，0.1mmo/L
PMSF)。搅拌均匀后用8层纱布过滤，滤液在4℃下，12000 g离心20 min，收集
上清液作为黑芥子酶租提液(摘自一篇硕士论文)

其中60 mL提取缓冲液(O.2 mol／L Tris—HCI缓冲液，pH7.5，5％甘油，l mmo/L EDTA，3 mmol／L DTT，0.1mmo/L PMSF)看不明白啊，这个提取液是怎么配制的啊？
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1楼2011-04-14 09:36:36
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lydiachen

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我还是没能明白这个问题，我也遇到同样的问题，能不能请您给我详细地讲讲该怎么配，比如我需要一升，那么是把所有的量算出来，混合在一起，最后定容到1升么，那样的话ph值不会发生变化么
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8楼2014-06-04 14:56:20
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js_yangbin

金虫 (正式写手)
求解答
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2楼2011-04-14 09:40:30
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reasonspare

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+5, EPI+1): 专业 2011-04-14 11:42:45
引用回帖:
Originally posted by js_yangbin at 2011-04-14 09:36:36:
最近看了一些蛋白质提取相关的文献，经常会看到类似于下面的一些描述：取20 g西兰花种子，用液氮研磨成粉末，加60 mL提取缓冲液(O.2 mol／L
Tris—HCI缓冲液，pH7.5，5％甘油，l mmo/L EDTA，3 mmol／ ...

问：

其中60 mL提取缓冲液(O.2 mol／L Tris—HCI缓冲液，pH7.5，5％甘油，l mmo/L EDTA，3 mmol／L DTT，0.1mmo/L PMSF)看不明白啊，这个提取液是怎么配制的啊？
如果你配制100ml 提取缓冲液，你知道应该怎么计算用量


将Tris-HCl 配成1M （或者0.5M）, 调整pH7.5，灭菌备用
如果你配制100ml 提取缓冲液，你知道应该怎么计算用量

EDTA 配成1M 或者0.1M 备 灭菌用
如果你配制100ml 提取缓冲液，你知道应该怎么计算用量

3 mmol／L DTT，
可配成100mM的母液，分装-20保存
如果你配制100ml 提取缓冲液，你知道应该怎么计算用量

5％甘油，为体积比

0.1mmo/L PMSF， 可以配成母液，也可以直接计算晶体用量
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大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
3楼2011-04-14 11:21:43
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js_yangbin

金虫 (正式写手)
明白了，哈哈，谢谢斑竹
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4楼2011-04-14 11:34:37
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