24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

js_yangbin

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 397.7
散金: 220
红花: 4
沙发: 1
帖子: 365
在线: 228.5小时
虫号: 792235
注册: 2009-06-11
性别: GG
专业: 生物化学

[交流] 【求助】酶的提取缓冲液的问题已有5人参与

最近看了一些蛋白质提取相关的文献，经常会看到类似于下面的一些描述：取20 g西兰花种子，用液氮研磨成粉末，加60 mL提取缓冲液(O.2 mol／L
Tris—HCI缓冲液，pH7.5，5％甘油，l mmo/L EDTA，3 mmol／L DTT，0.1mmo/L
PMSF)。搅拌均匀后用8层纱布过滤，滤液在4℃下，12000 g离心20 min，收集
上清液作为黑芥子酶租提液(摘自一篇硕士论文)

其中60 mL提取缓冲液(O.2 mol／L Tris—HCI缓冲液，pH7.5，5％甘油，l mmo/L EDTA，3 mmol／L DTT，0.1mmo/L PMSF)看不明白啊，这个提取液是怎么配制的啊？

回复此楼

» 猜你喜欢

博士读完未来一定会好吗已经有21人回复
导师想让我从独立一作变成了共一第一已经有5人回复
到新单位后，换了新的研究方向，没有团队，持续积累2区以上论文，能申请到面上吗已经有11人回复
读博已经有4人回复
JMPT 期刊投稿流程已经有4人回复
心脉受损已经有5人回复
Springer期刊投稿求助已经有4人回复
小论文投稿已经有3人回复
Bioresource Technology期刊，第一次返修的时候被退回好几次了已经有9人回复
申请2026年博士已经有6人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

请问酶切缓冲液的保存及使用问题! 已经有3人回复
测酶活的蛋白怎么保存已经有3人回复
一个可以从从缓存中提取视频观看的软件已经有19人回复
提取DNA时用的TE裂解液和TE缓冲液的区别？已经有10人回复
CAT POD SOD测定中提取液的问题已经有14人回复
Tris-HCl和PBS缓冲液的区别和用途已经有7人回复
用pH6.5缓冲液和PVPP提取多酚氧化酶，测酶活的时候为什么吸光度随时间逐渐降低呢已经有12人回复
如何制备粗酶液啊？已经有8人回复
求助 PMSF 缓冲液使用量已经有13人回复
求助：过氧化物酶提取及活性测定，颜色、吸光度都无变化已经有9人回复
请问各位，研究酶体外活性时，如何选择合适的缓冲体系？已经有6人回复
植物PAL及CAT两种酶测定中遇到的问题已经有13人回复
关于测定植物CAT的问题已经有19人回复
溶菌酶缓冲液怎么配的已经有10人回复
求助微生物琥珀酸脱氢酶测定问题已经有11人回复
基因组提取过程中加入溶菌酶有白色沉淀已经有13人回复
酶低温保存问题已经有7人回复
【求助/交流】有关磷酸盐缓冲液的问题PBS和PB的区别已经有14人回复
【求助/交流】为什么用酶最适PH缓冲液提酶酶没有活性？已经有13人回复
【求助】蛋白提取率的问题已经有13人回复
【求助/交流】DNA提取缓冲液的问题（乳白色还是澄清）已经有13人回复

1楼2011-04-14 09:36:36

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

js_yangbin

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 397.7
散金: 220
红花: 4
沙发: 1
帖子: 365
在线: 228.5小时
虫号: 792235
注册: 2009-06-11
性别: GG
专业: 生物化学

求解答

回复此楼

2楼2011-04-14 09:40:30

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

reasonspare

木虫 (著名写手)

BioEPI: 10
应助: 0 (幼儿园)
贵宾: 0.894
金币: 2262.1
红花: 11
帖子: 1908
在线: 72.5小时
虫号: 180928
注册: 2006-02-10
专业: All in one

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+5, EPI+1): 专业 2011-04-14 11:42:45

引用回帖:

Originally posted by js_yangbin at 2011-04-14 09:36:36:
最近看了一些蛋白质提取相关的文献，经常会看到类似于下面的一些描述：取20 g西兰花种子，用液氮研磨成粉末，加60 mL提取缓冲液(O.2 mol／L
Tris—HCI缓冲液，pH7.5，5％甘油，l mmo/L EDTA，3 mmol／ ...

问：

其中60 mL提取缓冲液(O.2 mol／L Tris—HCI缓冲液，pH7.5，5％甘油，l mmo/L EDTA，3 mmol／L DTT，0.1mmo/L PMSF)看不明白啊，这个提取液是怎么配制的啊？
如果你配制100ml 提取缓冲液，你知道应该怎么计算用量

将Tris-HCl 配成1M （或者0.5M）, 调整pH7.5，灭菌备用
如果你配制100ml 提取缓冲液，你知道应该怎么计算用量

EDTA 配成1M 或者0.1M 备灭菌用
如果你配制100ml 提取缓冲液，你知道应该怎么计算用量

3 mmol／L DTT，
可配成100mM的母液，分装-20保存
如果你配制100ml 提取缓冲液，你知道应该怎么计算用量

5％甘油，为体积比

0.1mmo/L PMSF，可以配成母液，也可以直接计算晶体用量