| 查看: 2351 | 回复: 10 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】关于提取基因组DNA过程中遇到的难题
|
|||
|
最近在提取基因组DNA，遇到一个难题。 方法如下： 1． 将待测菌体和模式菌株培养至对数生长期，取50ml培养液，4℃ 14,000rpm离心5min。 2． 加5ml 0.85% NaCl溶液，充分悬浮后4℃ 14,000rpm离心5min，弃上清。 3． 加3ml STE 溶液，充分悬浮后加30μl（100mg/ml）溶菌酶，混匀后37℃温浴60 min。 4． 加330μl 10%SDS，加40μl蛋白酶K（20mg/ml），37℃温浴2h。 5． 加入5MNaCl（850μl），使终浓度为1M，充分混匀。 6． 加等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），充分混匀，4℃14,000rpm，离心5min，吸上层水相于另一干净离心管中。 7． 再加等体积的氯仿：异戊醇（24：1），混匀后4℃ 6,000rpm，离心10min，吸上层水相于另一干净离心管中。 8． 加入5μl RNase(12.5mg/ml)，37℃温浴60min。 9． 重复步骤6和步骤7，直至中间无蛋白层。 10. 加等倍体积的预冷异丙醇，用玻璃棒缠出丝状DNA。 11．用70%的乙醇进行脱盐处理后自然风干。 现提取同一属的四株菌，结果其它3株很容易就提取出来了，而且DNA量还比较大，但是有一株无论如何也不能在最后卷出DNA。 该菌培养3或4d，除蛋白时发现蛋白层很厚，培养2d的话除蛋白时蛋白层比较薄。这是什么原因？为什么这个菌这么难搞定？ 同时镜检观察4d 和 2d 的菌体都没有自溶现象。 该菌为革兰氏阴性菌，换用CTAB法提取，最后仍是无法卷出DNA丝（离心有沉淀）。初始菌量很大，加了很多溶菌酶和蛋白酶K，破壁应该没什么问题，可就是无法得到那种卷出的DNA丝。 [ Last edited by 802311820 on 2011-4-14 at 20:36 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有145人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 基因组DNA提取问题
已经有32人回复
- 全血基因组的提取问题
已经有6人回复
- 小鼠肝脏基因组DNA提取大部分降解为300-500bp了
已经有11人回复
- 真菌基因组DAN提取图片，求高人指点
已经有20人回复
- 基因组提取过程中加入溶菌酶有白色沉淀
已经有13人回复
- 酵母 基因组提取问题
已经有8人回复
- 植物基因组DNA提取的一些疑问~
已经有10人回复
- 放线菌基因组DNA提取后，用TE不溶！！？
已经有20人回复
- 【求助/交流】关于细菌基因组DNA提取的问题？
已经有5人回复
- 【求助/交流】提取基因组DNA后琼脂糖凝胶电泳显示拖尾
已经有12人回复
- 【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非�
已经有11人回复
6楼2011-04-13 12:14:38
2楼2011-04-13 11:45:28
3楼2011-04-13 11:54:34
4楼2011-04-13 12:00:48
5