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liulanhua

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】蛋白溶液浓缩已有15人参与

我提取的蛋白溶液浓度太低,想浓缩一下。请问各位有没有什么简单的方法。
我看到有人说可以选用孔径较小的凝胶,如SephadexG25或G50,将凝胶直接加入蛋白溶液中。根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。放入冰箱内,凝胶粒子吸水后,通过离心除去。
这样可以吗?对蛋白会有什么影响吗?
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金虫 (正式写手)

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Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-04-12 20:23:54:
我没听说过楼主所说的做法,我很想知道是谁告诉你的,他这么做过没有。

是从网上搜到的
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5楼2011-04-13 08:13:47
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金虫 (正式写手)

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Originally posted by brightfuture01 at 2011-04-12 17:09:35:
我觉得最为便捷的是超滤管浓缩。

还得再买超滤离心管 , 是不是很贵啊?
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6楼2011-04-13 08:25:35
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liulanhua

金虫 (正式写手)

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Originally posted by brightfuture01 at 2011-04-13 08:53:53:
不贵,几十块钱一个,一个管浓缩一个蛋白,不要混用,可以重复利用。

人家不零卖啊。我看都是一包十几个呢, 我是没必要买那么多
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9楼2011-04-13 08:56:00
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金虫 (正式写手)

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Originally posted by xiaohaizi0220 at 2011-04-13 08:48:28:
我以前用的两种方法,你看实验室条件可以选用,一、4度条件下PEG4000干粉包埋透析袋,不断把需浓缩的蛋白质溶液加入到透析袋里,直到剩下很小的体积(如1ml);二、真空冻干。

恩 这两个方法我知道,就是我实验室有葡聚糖凝胶,看网上蛋白浓缩方法中有我说的那种方法,看来大家都没用过,那我就试试其他方法吧
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13楼2011-04-13 09:19:07
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金虫 (正式写手)

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Originally posted by xiaohaizi0220 at 2011-04-13 08:48:28:
我以前用的两种方法,你看实验室条件可以选用,一、4度条件下PEG4000干粉包埋透析袋,不断把需浓缩的蛋白质溶液加入到透析袋里,直到剩下很小的体积(如1ml);二、真空冻干。

用透析袋的话,除了用PEG4000干粉包埋透析袋还能用啥啊?我实验室有8000-14000的透析袋,我的蛋白大小为40KD
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15楼2011-04-13 15:08:26
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金虫 (正式写手)

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Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-04-15 23:11:33:
你是不是从这个网页上看到的?有没有想过溶胀后的凝胶怎么处理?如果丢掉有点可惜,如果保存着,不知道以后还能不能有人用。http://www.39kf.com/yyjj/biotech ... um/10/topic/5723195,写得非常简单。就是不知道有没有人用过。我想凝胶烘干之后是不是还能再用
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17楼2011-04-16 09:16:00
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金虫 (正式写手)

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Originally posted by xiaohaizi0220 at 2011-04-16 16:39:36:
我看到的资料里都是用的PEG,大于4000的也可以。你所说的透析袋对你的蛋白没有问题。透析袋用之前注意要处理。该步骤没有什么困难,就是注意温度,浓缩的速度也可以接受。祝你好运

前处理就是用沸水煮10min吧,浓缩过程中对温度有要求吗?
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20楼2011-04-17 09:28:49
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金虫 (正式写手)

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Originally posted by suenmomo at 2011-04-19 11:31:27:
楼主蛋白体积小的话用根管子浓缩就好了,体积大的话得用膜包才行啊!

用关注子什么意思啊?不是需要吧蛋白溶液装到透析袋里,外面放PEG吗?
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23楼2011-04-20 11:29:45
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金虫 (正式写手)

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Originally posted by yapingchen at 2011-04-28 23:25:56:
可以将其放入透析袋中,然后用聚乙二醇(强烈的吸水性)包埋浓缩。

我的透析袋是8000-10000的,用PEG6000包埋可以吗?有人说PEG6000会进到透析袋内。我前几天浓缩过程中,透析袋好像破了,PEG溶解后可能进到透析袋里,蛋白沉淀了,但不是那种絮状的沉淀,是很细的那种,聚到试管底了。这种现象蛋白变性了吗?
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26楼2011-05-09 15:52:19
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