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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】PBS缓冲液的pH值问题
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lsx08

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】PBS缓冲液的pH值问题

我用凝胶柱做蛋白，采用磷酸盐缓冲溶液做流动相，我想问一下怎么可以使磷酸盐的pH值由高到低梯度洗脱呢？（流动相中不可加有机相）请各位高手指导一下，谢谢了！
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1楼2011-04-12 11:14:57
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
lsx08(金币+1): 2011-04-12 13:18:06
只能配置梯度PH值的PBS啦
然后由高到底滴家梯度PBS来洗脱了
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2楼2011-04-12 11:56:32
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)
lsx08(金币+1): 2011-04-12 13:18:11
lsx08(金币+2): 谢谢回复指导！ 2011-04-12 13:19:27
分别配置各个pH的PB，（配置好后需要校正下pH的）
。然后依次用蠕动泵打入。
pH  8.0 （2V）-
pH  7.5 （2V）
pH  7.0 （2V）
pH  6.5（2V）

然后每个梯度上样，例如都2个柱体积。如果测得你的蠕动泵的速率，
例如每分钟2 mL， 就可以按时间来计算流量。

[ Last edited by HarveyWang on 2011-4-12 at 13:17 ]
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3楼2011-04-12 13:13:25
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lsx08

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2011-04-12 13:13:25:
分别配置各个pH的PB，（配置好后需要校正下pH的）
。然后依次用蠕动泵打入。
pH  8.0 （2V）-
pH  7.5 （2V）
pH  7.0 （2V）
pH  6.5（2V）

然后每个梯度上样，例如都2个柱体积。如果测得你的蠕动泵的速 ...

可是我是用的凝胶色谱柱，用HPLC做，没办法那样加流动相呢。
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4楼2011-04-12 13:22:59
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lsx08

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-04-12 11:56:32:
只能配置梯度PH值的PBS啦
然后由高到底滴家梯度PBS来洗脱了

我用的是凝胶色谱柱，用HPLC做，还有其他的办法可以做吗？可不可以A相用磷酸盐，B相用磷酸水溶液呢？
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5楼2011-04-12 13:34:25
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by lsx08 at 2011-04-12 13:34:25:
我用的是凝胶色谱柱，用HPLC做，还有其他的办法可以做吗？可不可以A相用磷酸盐，B相用磷酸水溶液呢？

这个没做过
不知道能不能行
你倒是可以试试
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6楼2011-04-12 15:44:27
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henkally

禁虫 (著名写手)
★ ★
lsx08(金币+1): 谢谢！ 2011-04-13 08:28:29
reasonspare(金币+2): 谢谢分享 2011-04-13 10:45:08
本帖内容被屏蔽
7楼2011-04-13 00:43:18
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lsx08

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by henkally at 2011-04-13 00:43:18:
LZ做的是蛋白，为何用HPLC而不是FPLC呢？
用HPLC 是为了制备？如果是这样的话，其实还是能做的，得用双泵的，象岛津10A
如果是FPLC那基本都是有混合功能的，两瓶不同PH的PBS，机器自动配，进行梯度洗脱。AKTA系 ...

我们这边没有FPLC，所以只能用HPLC，实验试试，谢谢！
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8楼2011-04-13 08:29:30
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