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charster

新虫 (小有名气)


[交流] 【求助】变性聚丙烯酰胺电泳的marker怎么处理

实验室只有takara的DL2000, 该对marker进行变性处理,还是可以直接加入?
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charster

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by holyala at 2011-04-12 09:38:18:
呃...双链DNA在变性胶里面自己就会变性了,双链变单链~~你的样品是什么?如果是双链DNA的话,非变性PAGE会比较合适一点吧。我建议不要在变性胶里用双链DNA marker,不然就会:1.不准;2.分不清marker位置。具体的 ...

我的样品是双链DNA,该跑变性还是非变性呢? 以前没做过,只是两个DNA片段相差39bp, 琼脂糖分离效果不好,才想用聚丙烯酰胺凝胶的。其实也不清楚变性和非变性的区别。望指点,谢谢啦
3楼2011-04-12 16:09:27
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holyala

木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★
charster(金币+2):谢谢参与
看天(金币+5): 2011-04-13 09:12:13
呃...双链DNA在变性胶里面自己就会变性了,双链变单链~~你的样品是什么?如果是双链DNA的话,非变性PAGE会比较合适一点吧。我建议不要在变性胶里用双链DNA marker,不然就会:1.不准;2.分不清marker位置。具体的可以见下图。这是两次SDS-PAGE的结果拼起来的,从左往右第一条泳道是 50bp 双链DNA marker,第二泳道是RNA样品,第三泳道是100~1000nt 单链RNA marker,第四泳道是另一个RNA样品。可以明显看到第一泳道的marker由于DNA解链而变得模糊不清了,有的条带由一条变成了两条...


[ Last edited by holyala on 2011-4-12 at 09:43 ]
2楼2011-04-12 09:38:18
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holyala

木虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by charster at 2011-04-12 16:09:27:
我的样品是双链DNA,该跑变性还是非变性呢? 以前没做过,只是两个DNA片段相差39bp, 琼脂糖分离效果不好,才想用聚丙烯酰胺凝胶的。其实也不清楚变性和非变性的区别。望指点,谢谢啦

嗯...你是要做回收呢,还是仅仅做个鉴定?另外,这两个DNA片段大小大概是多少?100bp、500bp还是1kb以上?
4楼2011-04-12 16:46:22
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charster

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by holyala at 2011-04-12 16:46:22:
嗯...你是要做回收呢,还是仅仅做个鉴定?另外,这两个DNA片段大小大概是多少?100bp、500bp还是1kb以上?

要回收的,片段是200bp
5楼2011-04-12 16:54:11
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