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【求助/交流】用毕赤酵母表达载体pPIC9K表达蛋白时分子量的估计？已有4人参与
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请问各位，我用毕赤酵母表达载体表达目的蛋白，在估计蛋白分子量时，是否要在目的蛋白编码氨基酸前加上信号肽的部分序列，还是说只要单纯估计目的蛋白的大小就可以了？ 现在的情况，单纯目的蛋白分子量是51.5kDa，但我蛋白电泳跑出来的条带好像是在54kDa左右的样子。 |
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3楼2011-04-11 21:25:41
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+2): 回答很详细 2011-04-09 20:57:52
西瓜(金币+3, EPI+1): 专业呢，呵呵 2011-04-11 22:48:46
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西瓜(金币+3, EPI+1): 专业呢，呵呵 2011-04-11 22:48:46
| 按道理是蛋白分子量时除去信号肽部分，因为信号肽在穿过膜时会被信号肽酶切割掉的，剩下的只是成熟肽。但是工程菌经常会出现切割不完全和表达的蛋白滞留胞内的情况，这时候蛋白的分子量是包括信号肽部分的。如果你的样品是来自发酵液，也就是分泌出来了的，就应该不包括信号肽部分。还有就是SDS-PAGE出来的分子量不一定准确的，有偏差，跟蛋白的组成和结构有关系。 |
2楼2011-04-09 20:37:44
4楼2011-09-05 21:52:00
zhuzhuwinner
禁虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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5楼2021-07-16 16:41:21