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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】诚心请教一个关于拟南芥突变体鉴定的问题
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liucaifeng

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】诚心请教一个关于拟南芥突变体鉴定的问题已有8人参与

订的SALK库的拟南芥T-DNA插入突变体，DNA水平鉴定有纯合子，但RNA水平鉴定目的基因却仍能表达，几个Line 都是这样，快郁闷了。不知道大家有碰到过类似情况，可能是什么愿意导致的呢？
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1楼2011-04-07 20:36:30
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xiemin217

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
jhu132llh(金币+2): good,感谢积极应助 2011-11-01 15:28:15
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8楼: Originally posted by liucaifeng at 2011-10-31 19:26:49:
我基本上把全部能订的line都订了鉴定，不管插外显子还是内含子上的，结果都是这种情况，问过好多人都没见过这种情况，甚至都不相信。你真的也碰到够这种情况吗，是不是与基因有关呢？

我自己就碰过呀，我问过北清中，他们都有见过，国外也是，这个不好办，你用纯和和杂合都做个鉴定看下，如果看表型的话就先验证下表型，可以的话先做下去，再做RNAi了。
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9楼2011-11-01 10:13:58
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咸鱼

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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Originally posted by liucaifeng at 2011-04-07 20:36:30:
订的SALK库的拟南芥T-DNA插入突变体，DNA水平鉴定有纯合子，但RNA水平鉴定目的基因却仍能表达，几个Line 都是这样，快郁闷了。不知道大家有碰到过类似情况，可能是什么愿意导致的呢？

RNA水平鉴定就是做RT或者NOrthern吧，这样的话你选择做PCR的那一段引物或Northern的那一段探针是T-DNA插入之前还是之后的序列？
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2楼2011-04-10 13:06:53
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liucaifeng

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 咸鱼 at 2011-04-10 13:06:53:
RNA水平鉴定就是做RT或者NOrthern吧，这样的话你选择做PCR的那一段引物或Northern的那一段探针是T-DNA插入之前还是之后的序列？

做RT，PCR引物设计的还是跨T-DNA的，按理说不该P出来的，可就是能P吃条带来，测序结果也表明的确是目的条带
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3楼2011-04-11 10:11:45
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咸鱼

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by liucaifeng at 2011-04-11 10:11:45:
做RT，PCR引物设计的还是跨T-DNA的，按理说不该P出来的，可就是能P吃条带来，测序结果也表明的确是目的条带

那是不是DNA检测出了什么差错？
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4楼2011-04-12 19:52:25
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