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liucaifeng

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】诚心请教一个关于拟南芥突变体鉴定的问题已有8人参与

订的SALK库的拟南芥T-DNA插入突变体,DNA水平鉴定有纯合子,但RNA水平鉴定目的基因却仍能表达,几个Line 都是这样,快郁闷了。不知道大家有碰到过类似情况,可能是什么愿意导致的呢?
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xiemin217

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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1225921楼: Originally posted by 叶寻 at 2011-11-07 22:50:37:
我的插在启动子区域,离起始密码子比较近的

插在启动子区域,基因表达有三种情况:高、平、低,你要做些分析才可以,一般见到多的是比原来的低,你可以看下蛋白水平,这个有说服力。
16楼2012-04-04 10:02:00
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咸鱼

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by liucaifeng at 2011-04-07 20:36:30:
订的SALK库的拟南芥T-DNA插入突变体,DNA水平鉴定有纯合子,但RNA水平鉴定目的基因却仍能表达,几个Line 都是这样,快郁闷了。不知道大家有碰到过类似情况,可能是什么愿意导致的呢?

RNA水平鉴定就是做RT或者NOrthern吧,这样的话你选择做PCR的那一段引物或Northern的那一段探针是T-DNA插入之前还是之后的序列?
2楼2011-04-10 13:06:53
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liucaifeng

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 咸鱼 at 2011-04-10 13:06:53:
RNA水平鉴定就是做RT或者NOrthern吧,这样的话你选择做PCR的那一段引物或Northern的那一段探针是T-DNA插入之前还是之后的序列?

做RT,PCR引物设计的还是跨T-DNA的,按理说不该P出来的,可就是能P吃条带来,测序结果也表明的确是目的条带
3楼2011-04-11 10:11:45
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咸鱼

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by liucaifeng at 2011-04-11 10:11:45:
做RT,PCR引物设计的还是跨T-DNA的,按理说不该P出来的,可就是能P吃条带来,测序结果也表明的确是目的条带

那是不是DNA检测出了什么差错?
4楼2011-04-12 19:52:25
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