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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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niliudeyu

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】50bp以下DNA琼脂糖电泳的条件

30bp单链DNA琼脂糖电泳,琼脂糖浓度4%,电压110V,DNA浓度1μM上样量10μl,gel image能隐约看到条带不明显,荧光很微弱,可以怎样优化一下?琼脂糖浓度太高,制的凝胶很多气泡,不知道降低一点是否可以?
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amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-02 19:58:03
跑聚丙烯酰胺凝胶电泳吧,50bp以下琼脂糖凝胶电泳就不是很好分了。
2楼2011-04-02 02:04:20
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yabxxh

木虫 (正式写手)


niliudeyu(金币+1): 2011-04-02 22:31:22
5.0试一下吧,和你的Marker保持一致
3楼2011-04-02 09:16:56
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


niliudeyu(金币+1): 2011-04-02 22:31:28
Page胶分离,像纯化引物一样。
4楼2011-04-02 10:56:11
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)


用琼脂糖不容易吧
5楼2011-04-02 19:22:14
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六妖妖

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
琼脂糖胶浓度太大会很厚的。还是PAGE胶好用
6楼2011-04-06 11:45:26
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niliudeyu

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 六妖妖 at 2011-04-06 11:45:26:
琼脂糖胶浓度太大会很厚的。还是PAGE胶好用

确实 倒胶的时候很不好倒。。。
7楼2011-04-06 13:56:01
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果有条件的话可以把胶真空抽滤下,上样量可以多加些
8楼2011-04-06 23:07:43
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UFOWUHAN

新虫 (小有名气)



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Originally posted by brightfuture01 at 2011-04-02 02:04:20:
跑聚丙烯酰胺凝胶电泳吧,50bp以下琼脂糖凝胶电泳就不是很好分了。

PAGE 之后怎么观察单链DNA?现在的染料不是只能检测双链DNA吗?
9楼2011-04-07 00:47:58
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by UFOWUHAN at 2011-04-07 00:47:58:
PAGE 之后怎么观察单链DNA?现在的染料不是只能检测双链DNA吗?

PAGE还分 native和denaturing的。。。。。

native是用来分离双链的。。

denaturing用来分离单链。。可以用银染,也可以用sybr green (与双链结合时呈绿色荧光,与单链结合时呈橙黄色)。
10楼2011-04-07 01:00:37
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w.king124

金虫 (正式写手)


楼主做的是适体?
11楼2011-04-07 09:15:22
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UFOWUHAN

新虫 (小有名气)



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引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-04-07 01:00:37:
PAGE还分 native和denaturing的。。。。。

native是用来分离双链的。。

denaturing用来分离单链。。可以用银染,也可以用sybr green (与双链结合时呈绿色荧光,与单链结合时呈橙黄色)。

学习了,
看了SYBR GREEN介绍,好像是含有单链的DNA显橙黄色。只有纯的单链DNA还能显橙黄色?染料可以与玻璃器皿结合,影响严重不,另外,看见GOLD-VIEW可以对单链DNA显红色。主要想问的是用PAGE纯化引物的问题?跑变性PAGE胶之后的检测,以及怎么从PAGE胶里面洗脱引物?
12楼2011-04-07 10:56:47
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by UFOWUHAN at 2011-04-07 10:56:47:
学习了,
看了SYBR GREEN介绍,好像是含有单链的DNA显橙黄色。只有纯的单链DNA还能显橙黄色?染料可以与玻璃器皿结合,影响严重不,另外,看见GOLD-VIEW可以对单链DNA显红色。主要想问的是用PAGE纯化引物的问题 ...

这个我问过技术支持,说是用自己配置的buffer浸泡胶条,将引物溶出。然后再用很短的C18柱子 还是什么进行浓缩。
13楼2011-04-07 11:15:53
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niliudeyu

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by w.king124 at 2011-04-07 09:15:22:
楼主做的是适体?

不是额
14楼2011-04-07 11:47:34
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niliudeyu

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by UFOWUHAN at 2011-04-07 10:56:47:
学习了,
看了SYBR GREEN介绍,好像是含有单链的DNA显橙黄色。只有纯的单链DNA还能显橙黄色?染料可以与玻璃器皿结合,影响严重不,另外,看见GOLD-VIEW可以对单链DNA显红色。主要想问的是用PAGE纯化引物的问题 ...

我的样品是单链DNA 用SYBRGreenⅡ,显橙黄色,灵敏度比较高。不过与玻璃器皿结合??这个不知道额 学习了
15楼2011-04-07 11:53:35
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UFOWUHAN

新虫 (小有名气)



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引用回帖:
Originally posted by niliudeyu at 2011-04-07 11:53:35:
我的样品是单链DNA 用SYBRGreenⅡ,显橙黄色,灵敏度比较高。不过与玻璃器皿结合??这个不知道额 学习了

我没用过这种染料,只是在网站上看的介绍。你用的什么器皿染色的?
16楼2011-04-07 12:18:05
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