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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】50bp以下DNA琼脂糖电泳的条件
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niliudeyu

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】50bp以下DNA琼脂糖电泳的条件

30bp单链DNA琼脂糖电泳，琼脂糖浓度4%，电压110V，DNA浓度1μM上样量10μl，gel image能隐约看到条带不明显,荧光很微弱,可以怎样优化一下？琼脂糖浓度太高，制的凝胶很多气泡，不知道降低一点是否可以？
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1楼 2011-04-02 00:54:55
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-02 19:58:03
跑聚丙烯酰胺凝胶电泳吧，50bp以下琼脂糖凝胶电泳就不是很好分了。
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2楼2011-04-02 02:04:20
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yabxxh

木虫 (正式写手)
niliudeyu(金币+1): 2011-04-02 22:31:22
5.0试一下吧，和你的Marker保持一致
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3楼2011-04-02 09:16:56
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
niliudeyu(金币+1): 2011-04-02 22:31:28
Page胶分离，像纯化引物一样。
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4楼2011-04-02 10:56:11
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)
用琼脂糖不容易吧
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5楼2011-04-02 19:22:14
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六妖妖

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
琼脂糖胶浓度太大会很厚的。还是PAGE胶好用
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6楼2011-04-06 11:45:26
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niliudeyu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 六妖妖 at 2011-04-06 11:45:26:
琼脂糖胶浓度太大会很厚的。还是PAGE胶好用

确实 倒胶的时候很不好倒。。。
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7楼2011-04-06 13:56:01
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果有条件的话可以把胶真空抽滤下，上样量可以多加些
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8楼2011-04-06 23:07:43
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UFOWUHAN

新虫 (小有名气)
★
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Originally posted by brightfuture01 at 2011-04-02 02:04:20:
跑聚丙烯酰胺凝胶电泳吧，50bp以下琼脂糖凝胶电泳就不是很好分了。

PAGE 之后怎么观察单链DNA?现在的染料不是只能检测双链DNA吗？
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9楼2011-04-07 00:47:58
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
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引用回帖:
Originally posted by UFOWUHAN at 2011-04-07 00:47:58:
PAGE 之后怎么观察单链DNA?现在的染料不是只能检测双链DNA吗？

PAGE还分 native和denaturing的。。。。。

native是用来分离双链的。。

denaturing用来分离单链。。可以用银染，也可以用sybr green （与双链结合时呈绿色荧光，与单链结合时呈橙黄色）。
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10楼2011-04-07 01:00:37
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w.king124

金虫 (正式写手)
楼主做的是适体？
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11楼2011-04-07 09:15:22
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UFOWUHAN

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-04-07 01:00:37:
PAGE还分 native和denaturing的。。。。。

native是用来分离双链的。。

denaturing用来分离单链。。可以用银染，也可以用sybr green （与双链结合时呈绿色荧光，与单链结合时呈橙黄色）。

学习了，
看了SYBR GREEN介绍，好像是含有单链的DNA显橙黄色。只有纯的单链DNA还能显橙黄色？染料可以与玻璃器皿结合，影响严重不，另外，看见GOLD-VIEW可以对单链DNA显红色。主要想问的是用PAGE纯化引物的问题？跑变性PAGE胶之后的检测，以及怎么从PAGE胶里面洗脱引物？
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12楼2011-04-07 10:56:47
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by UFOWUHAN at 2011-04-07 10:56:47:
学习了，
看了SYBR GREEN介绍，好像是含有单链的DNA显橙黄色。只有纯的单链DNA还能显橙黄色？染料可以与玻璃器皿结合，影响严重不，另外，看见GOLD-VIEW可以对单链DNA显红色。主要想问的是用PAGE纯化引物的问题 ...

这个我问过技术支持，说是用自己配置的buffer浸泡胶条，将引物溶出。然后再用很短的C18柱子 还是什么进行浓缩。
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13楼2011-04-07 11:15:53
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niliudeyu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by w.king124 at 2011-04-07 09:15:22:
楼主做的是适体？

不是额
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14楼2011-04-07 11:47:34
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niliudeyu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by UFOWUHAN at 2011-04-07 10:56:47:
学习了，
看了SYBR GREEN介绍，好像是含有单链的DNA显橙黄色。只有纯的单链DNA还能显橙黄色？染料可以与玻璃器皿结合，影响严重不，另外，看见GOLD-VIEW可以对单链DNA显红色。主要想问的是用PAGE纯化引物的问题 ...

我的样品是单链ＤＮＡ　用SYBRGreenⅡ，显橙黄色，灵敏度比较高。不过与玻璃器皿结合？？这个不知道额　学习了
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15楼2011-04-07 11:53:35
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UFOWUHAN

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by niliudeyu at 2011-04-07 11:53:35:
我的样品是单链ＤＮＡ　用SYBRGreenⅡ，显橙黄色，灵敏度比较高。不过与玻璃器皿结合？？这个不知道额　学习了

我没用过这种染料，只是在网站上看的介绍。你用的什么器皿染色的？
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16楼2011-04-07 12:18:05
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