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friend.11

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】急！半定量PCR结果太不稳定

我做半定量PCR相看基因表达量的变化趋势，上调、下调或者不变。做半定量PCR做了很久，每一个基因都重复做了好几次，可是结果相当的不稳定，一个基因有时候上调，有时候下调。我都不知道该怎么分析结果。烦哪！！！有没有做过半定量的朋友提供一点经验，帮帮忙啊！
先谢过了！由于之前散尽了金币，现在金币较少，我会逐渐加上去的！请大家帮帮忙！

[ Last edited by friend.11 on 2011-3-31 at 19:57 ]

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kinda_

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1楼 2011-03-30 20:52:40

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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

★ ★
friend.11(金币+2): 谢谢！ 2011-04-06 10:51:02
看天(金币+2): 鼓励 2011-04-06 12:53:51

引用回帖:

Originally posted by friend.11 at 2011-03-30 20:52:40:
我做半定量PCR相看基因表达量的变化趋势，上调、下调或者不变。做半定量PCR做了很久，每一个基因都重复做了好几次，可是结果相当的不稳定，一个基因有时候上调，有时候下调。我都不知道该怎么分析结果。烦哪！！！ ...

做半定量是很麻烦的事情
首先你得保证每个PCR反应之间的操作手法还有胶什么的没有什么太大的差异的，说白了，就是你的手法首先要稳定；
其次，照胶的影响也是挺大的，因为软件存在一个识别问题；
再次，你做半定量分析的时候，软件的使用也会挺有影响的，同样一块区域，选区大点和小点可能就会有差异，建议手动校正选区。

实在不行，就该定量吧，现在定量试剂盒都很成熟了，并且，定量的数据好发文章

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10楼2011-04-05 17:01:22

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咸鱼

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★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 感谢分享经验~ 2011-03-30 22:50:13
friend.11(金币+2): 你说的是定量！不过还是谢谢你！ 2011-03-31 19:46:44

我做过Real-time，我的基因每次做都挺稳定，你每次加样，操作都没问题吗？不过我们一个师兄芯片数据，我看有好多基因，三组数据之间结果也不稳定，有的上调，有的下调。我自己觉得这样的话，如果上调下调变化不大，是不是可以说基本上是对你所说的那个因素是不敏感的。它的不稳定只是因为环境或其他因素影响。至少跟那个因素之间没有直接关系，或者有也不是在基因水平，而是蛋白水平了吧。

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2楼2011-03-30 21:07:43

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