应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】做实时定量PCR需要校正内参吗？
101/1返回列表
查看: 2884  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xnbioinfor

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】做实时定量PCR需要校正内参吗？

实验室的同事做Real-time PCR 之前 都要先做半定量PCR，校正内参，只有内参条带亮度相差无几时才做实时定量， 校正内参有必要吗
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-03-22 23:16:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
首先没搞明白
既然你半定量就把内参校正好了，好做什么Real-time PCR，直接用半定量的结果就可以说明问题了。
显然，我的做法是首先半定量确定引物的特异性（单一条带，亮）
其次，根据提取RNA的浓度，大致保证反转录后所有的样品浓度较为一致，也可以核酸测定仪准确确定浓度
第三，Real-time PCR后将样品减去内参的Ct值，内参本来就是消除误差的。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-23 08:21:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by poog502 at 2011-03-23 08:21:39:
首先没搞明白
既然你半定量就把内参校正好了，好做什么Real-time PCR，直接用半定量的结果就可以说明问题了。
显然，我的做法是首先半定量确定引物的特异性（单一条带，亮）
其次，根据提取RNA的浓度，大致保证 ...

样品的RNA浓度差异不影响吗
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-25 23:56:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by xnbioinfor at 2011-03-25 23:56:45:
样品的RNA浓度差异不影响吗

内参本来就是消除样品量差异的，起始RNA浓度高了，内参信号就强，反之亦然。校正内参没必要。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-03-26 00:28:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

suuny

木虫 (小有名气)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by xnbioinfor at 2011-03-25 23:56:45:
样品的RNA浓度差异不影响吗

这个是有影响的！ 虽然有一定的容忍度。
尽量保证RT前所用的RNA量一致。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-03-26 05:00:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
如果不是相差特别大，无所谓~~
一般9个数量级以内线性都挺好，如果体系引物各方面没问题
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-03-26 09:35:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-26 09:35:44:
如果不是相差特别大，无所谓~~
一般9个数量级以内线性都挺好，如果体系引物各方面没问题

是这样的
回复此楼
7楼2011-03-26 13:52:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixingliang

新虫 (小有名气)

内参变化幅度大

★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
内参的CT值在多大才行，变化幅度在多少范围才合适
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-04-08 13:16:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adi623

新虫 (初入文坛)
★
xnbioinfor(金币+1): 谢谢参与
我的实验要测细胞外游离DNA，内参不见得好用，老师让我每份样本都测DNA浓度，做质量定量用来矫正内参，我没听懂啥意思，，每板都要测一个浓度梯度，用来校正板与板之间的差距，完全不明白是什么意思，各位大神能指点一下么

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-03-25 11:47:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adi623

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by poog502 at 2011-03-23 08:21:39
首先没搞明白
既然你半定量就把内参校正好了，好做什么Real-time PCR，直接用半定量的结果就可以说明问题了。
显然，我的做法是首先半定量确定引物的特异性（单一条带，亮）
其次，根据提取RNA的浓度，大致保证反 ...

请问不用内参可以么，直接用其次里的浓度质量定量
赞一下 回复此楼
10楼2016-03-30 19:26:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xnbioinfor 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭