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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】SDS-PAGE样品上样量
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老实人sdu3375

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE样品上样量

大家做SDS-PAGE时，一般用于处理的蛋白质的量是多少？再加多少的上样buffer混合煮沸？最终上样多少微升呢？怎样做这个电泳效果好呢？
PS：电泳仪是伯乐的~~
谢谢大家
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1楼 2011-03-22 13:09:57
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老实人sdu3375

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 396101466 at 2011-03-22 16:32:53:
上样蛋白的在5-10微克之间（上样体积一般为10微升），上样缓冲夜我们这边用的是10X的，和样品的体积比是1:1, 图片好看要求跑的电流小，时间就要求的要长些！

10X的缓冲液？体积比是1：1，为什么不是1：9呢？呵呵……
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6楼2011-03-22 22:18:05
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)
★
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-03-22 18:45:38
看情况了吧，一般5-20ul，蛋白质浓度高了就少上点。测一下蛋白质浓度，再看一下SDS-PAGE的检测浓度范围，在那个范围往里加就行了
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2楼2011-03-22 15:25:37
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-03-22 18:45:51
加5xbuffer  上样量理论上时20微升，但是一般17微升就加满了~~~~~~
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3楼2011-03-22 16:10:04
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396101466

金虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1): 继续鼓励 2011-03-22 19:05:21
引用回帖:
Originally posted by 老实人sdu3375 at 2011-03-22 13:09:57:
大家做SDS-PAGE时，一般用于处理的蛋白质的量是多少？再加多少的上样buffer混合煮沸？最终上样多少微升呢？怎样做这个电泳效果好呢？
PS：电泳仪是伯乐的~~
谢谢大家

上样蛋白的在5-10微克之间（上样体积一般为10微升），上样缓冲夜我们这边用的是10X的，和样品的体积比是1:1, 图片好看要求跑的电流小，时间就要求的要长些！
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5楼2011-03-22 16:32:53
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