应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】有引物二聚体、非特异性扩增带是怎么回事？
51/1返回列表
查看: 3536  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hupeng

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】有引物二聚体、非特异性扩增带是怎么回事？ 已有8人参与

请问一下各位大虾：
    我pcr反应后出现引物二聚体和多条非特异性扩增带，怎样解决呢？
    还有我目的片段只有87bp，怎样才能跑出一个比较好的结果。
    注：
         pcr反应液：taq酶（5U/μL）  0.2μL
                            10*pcr buffer      2.5μL
                            dNTP                   2μL
                            模板DNA              1.25μL
                            引物1                   1μL
                            引物2                    1μL
                            灭菌水                 up to 25μL
        pcr反应条件：94℃                 50sec
                              54℃                  30sec      （Tm值52℃）
                              72℃                  20sec       共35个循环
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
智者务其实，愚者争其名！
1楼 2011-03-21 15:50:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0610616

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
因为目标片段比较小，可能会出现非特异性杂带，我P200左右的也会有杂带出现，进过反复回收纯化就好了
赞一下(1人) 回复此楼
Everythingisok!
9楼2011-03-27 16:45:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请问是特异性引物还是简并引物？一般都有引物二聚体，不过设计的时候尽量是用软件看看，还有可以提升下退火，看看能不能消掉费特异性条带，这么短的片段是准备跑qPCR??
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-21 16:21:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hupeng

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jiangzhiang at 2011-03-21 16:21:37:
请问是特异性引物还是简并引物？一般都有引物二聚体，不过设计的时候尽量是用软件看看，还有可以提升下退火，看看能不能消掉费特异性条带，这么短的片段是准备跑qPCR??

是特异性引物。我做的sex marker，引物是别人发表文章里面的，但是我一直没做出结果来！
赞一下 回复此楼
智者务其实，愚者争其名！
3楼2011-03-21 21:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by hupeng at 2011-03-21 21:57:04:
是特异性引物。我做的sex marker，引物是别人发表文章里面的，但是我一直没做出结果来！

个人意见，别人的引物试试可以的话就用，不行就自己设计，文章里的引物未必就一定是真的
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-03-22 08:52:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +19 羊腰板 2026-08-21 22/1100 2026-08-25 10:38 by popular289
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 明天应该可查了！？ +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 科研孤儿太难了 +18 我4大白菜 2026-08-20 19/950 2026-08-24 09:47 by 凯恩广盛催化分�
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭