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雪人也怕冷

铜虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】western blot

求助:转膜后,丽春红染色条带很明显,5%脱脂奶粉过夜,一抗(TBST稀释2-1000)孵育4°过夜,TBST洗三次,二抗(TBST稀释0.5--1000),涂AB液,显色后为白板,什么条带都没有。是哪里出了问题?是不是没有曝光就说明显影定影液没问题?AB液刚买的新的,也应该没问题,高手帮分析分析啊,谢谢啦'
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河外生命

木虫 (小有名气)



雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
l丽春红染色是不会有问题的。我们实验室每次都是要用丽春红染色确认一下蛋白是否转上。之后用TBST洗一下就可以。
感觉你的情况跟我们实验室有段时间的情况很相似,就是发光时可以很明显的看到膜上的荧光,就是曝光后,胶片上什么都没有,是张白片。当时我们就觉得显影液有问题,后来换了新的显影液,果然没再出现那种状况。试下更换新的显影液吧。
33楼2011-04-28 15:35:07
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)


★ ★
雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:39:08
雪人也怕冷(金币+1): 2011-03-22 11:13:37
你是不应该有两块胶,一块儿用于染色观察条带是否明显且有无特异带。第二块儿用于转膜杂交,确定杂交信号。
现在是你的杂交结果没信号,若排除显色问题,就是你的跑胶或转膜出了披露。
5楼2011-03-18 22:09:44
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1992xlliu

金虫 (小有名气)


★ ★
雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:39:18
估计洗丽春红的过程中蛋白被洗掉了。
6楼2011-03-18 22:44:52
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libin051mail

铜虫 (初入文坛)


★ ★
雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:39:14
雪人也怕冷(金币+1): 2011-03-22 11:13:55
首先考虑一抗是否合理
其次二抗是否抗一抗
7楼2011-03-18 23:17:09
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