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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】western blot
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雪人也怕冷

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】western blot

求助：转膜后，丽春红染色条带很明显，5%脱脂奶粉过夜，一抗（TBST稀释2-1000）孵育4°过夜，TBST洗三次，二抗（TBST稀释0.5--1000），涂AB液，显色后为白板，什么条带都没有。是哪里出了问题？是不是没有曝光就说明显影定影液没问题？AB液刚买的新的，也应该没问题，高手帮分析分析啊，谢谢啦'
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1楼 2011-03-18 16:15:26
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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)
★
雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
做实验一定要做阳性对照，向别人要曾经做出来的蛋白来确定是不是操作问题；再试试一抗37度1.5—2h；混合二抗和AB液，暗室看是否有荧光
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11楼2011-03-21 20:46:55
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)
★ ★
雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:39:08
雪人也怕冷(金币+1): 2011-03-22 11:13:37
你是不应该有两块胶，一块儿用于染色观察条带是否明显且有无特异带。第二块儿用于转膜杂交，确定杂交信号。
现在是你的杂交结果没信号，若排除显色问题，就是你的跑胶或转膜出了披露。
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5楼2011-03-18 22:09:44
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1992xlliu

金虫 (小有名气)
★ ★
雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:39:18
估计洗丽春红的过程中蛋白被洗掉了。
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6楼2011-03-18 22:44:52
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libin051mail

铜虫 (初入文坛)
★ ★
雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:39:14
雪人也怕冷(金币+1): 2011-03-22 11:13:55
首先考虑一抗是否合理
其次二抗是否抗一抗
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7楼2011-03-18 23:17:09
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