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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA提取问题
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hhhmonkey

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】DNA提取问题

求助，DNA用异丙醇沉淀时，会一下出现很多白色粉末，请问这是为什么？该怎么处理。谢谢
我把过程说详细一些：
我提的是土壤样，一加进异丙醇就立即出现白色粉末状物析出，是在液体相中，上清液加入0.6倍体积的异丙醇，需要混合均匀，混合后并不清透，反而有白色粉末状析出物，特别奇怪，

[ Last edited by hhhmonkey on 2011-3-17 at 10:53 ]
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1楼 2011-03-16 18:23:43
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
hhhmonkey(金币+1): 谢谢啊，我已经处理了 2011-03-29 22:13:02
可能是析出的NaAC，我提植物DNA时也经常见白色粉末，现在是用异丙醇沉淀后直接把絮状ＤＮＡ挑到70%酒精里洗一下，再挑出来风干。
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14楼2011-03-21 17:11:03
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clare420

新虫 (小有名气)
hhhmonkey(金币+5): 非常感谢啊，我已经处理了 2011-03-29 22:13:35
你这个情况我见过，如果你是用高盐除掉一些杂质的话，那么沉淀的时候异丙醇不要预冷。
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18楼2011-03-29 11:30:11
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普通回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
提DNA用的是高盐么？
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2楼2011-03-16 19:17:33
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hhhmonkey

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by hhhmonkey at 2011-03-16 18:23:43:
求助，DNA用异丙醇沉淀时，会一下出现很多白色粉末，请问这是为什么？该怎么处理。谢谢

是的，是用的高盐
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3楼2011-03-16 22:45:48
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hhhmonkey

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-16 19:17:33:
提DNA用的是高盐么？

是的，是用的高盐
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4楼2011-03-16 22:46:08
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by hhhmonkey at 2011-03-16 22:46:08:
是的，是用的高盐

沉淀了多长时间？室温沉淀还是低温沉淀的？
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5楼2011-03-16 23:33:47
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★
scelab(金币+1): 谢谢交流 2011-03-17 08:20:31
异丙醇沉淀没有特异性,你只能用70乙醇多洗几次了
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6楼2011-03-17 07:15:20
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xwsooo

银虫 (小有名气)
怎么会是粉末？很奇怪，倒是会有一大团白色絮状样的，但是太多沉淀时可能是蛋白质或其他杂志
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7楼2011-03-17 10:28:00
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
会不会是干燥的时间太长，dna干透了，会不溶解的
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8楼2011-03-17 10:41:32
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
10楼2011-03-17 17:32:43
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杜杜

金虫 (小有名气)
我也遇到过这种问题，很郁闷，不知道问什么
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11楼2011-03-18 10:17:41
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hhhmonkey

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 杜杜 at 2011-03-18 10:17:41:
我也遇到过这种问题，很郁闷，不知道问什么

你是怎么处理的最后？
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12楼2011-03-20 00:15:57
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李子李

铁虫 (初入文坛)
hhhmonkey(金币+1): 谢谢啊 2011-03-29 22:12:39
可能是不溶性的蛋白吧，DNA吹干会是透明的，很容易就溶解的
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13楼2011-03-21 16:59:57
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xiadongliang

金虫 (正式写手)
hhhmonkey(金币+1): 谢谢啊，我已经处理了 2011-03-29 22:13:09
引用回帖:
Originally posted by hhhmonkey at 2011-03-16 18:23:43:
求助，DNA用异丙醇沉淀时，会一下出现很多白色粉末，请问这是为什么？该怎么处理。谢谢
我把过程说详细一些：
我提的是土壤样，一加进异丙醇就立即出现白色粉末状物析出，是在液体相中，上清液加入0.6倍体积的异 ...

有可能是盐析出，也有可能是蛋白析出了。
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15楼2011-03-21 17:16:56
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)
hhhmonkey(金币+1): 谢谢啊，我已经处理了 2011-03-29 22:13:15
白色粉末正常，试验中时常出现，离心之后会聚集成一块，一般不会影响继续实验，不过最好是出现絮状沉淀，呵呵，，，
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16楼2011-03-21 22:55:40
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另一个天堂

金虫 (小有名气)
蛋白质？？
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17楼2011-03-27 19:25:40
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clare420

新虫 (小有名气)
或者你降低一下高盐浓度。洗的时候70%的乙醇也不要预冷。
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19楼2011-03-29 11:31:52
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wazlf

银虫 (正式写手)
hhhmonkey(金币+1): 谢谢啊，我已经处理了 2011-03-29 22:13:50
这个可能是你的蛋白没提干净，DNA浓度太高，DNA断裂成小片段，加异丙醇时就出现这样的问题！
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20楼2011-03-29 11:55:10
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李子李

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 另一个天堂 at 2011-03-27 19:25:40:
蛋白质？？

杂质包括蛋白吗？主要目的是去蛋白的话异丙醇用不用遇冷呢，多谢指教
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21楼2011-03-30 14:15:38
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李子李

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by clare420 at 2011-03-29 11:30:11:
你这个情况我见过，如果你是用高盐除掉一些杂质的话，那么沉淀的时候异丙醇不要预冷。

杂质包括蛋白吗？主要目的是去蛋白的话异丙醇用不用遇冷呢，多谢指教
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22楼2011-03-30 14:16:17
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另一个天堂

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 李子李 at 2011-03-30 14:15:38:
杂质包括蛋白吗？主要目的是去蛋白的话异丙醇用不用遇冷呢，多谢指教

蛋白也是杂质，会影响后面DNA电泳。最好预冷，防止由于温度问题影响DNA。
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23楼2011-04-03 12:17:43
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clare420

新虫 (小有名气)
我做的时候没有预冷，影响不大，不过可能如果杂质较多的话，温度对核酸影响会大点。
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24楼2011-04-06 10:02:07
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crush_bc

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
糖类或蛋白质吧~~可以重提取一次，或者降低样品量~~
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25楼2011-12-06 23:23:17
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zhangjie801284

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
沉淀时间不要过长！或改用乙醇沉淀！
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26楼2011-12-07 19:07:26
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4920532949楼
2011-03-17 10:47   回复  
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